প্রোটিনেস কে এমএনজিএস (তরল)
প্রোটিনেস কে একটি স্থিতিশীল সেরিন প্রোটিস যার বিস্তৃত স্তরের নির্দিষ্টতা রয়েছে।এমনকি ডিটারজেন্টের উপস্থিতিতেও এটি স্থানীয় অবস্থায় অনেক প্রোটিনকে ক্ষয় করে।স্ফটিক এবং আণবিক গঠন অধ্যয়ন থেকে প্রমাণ পাওয়া যায় যে এনজাইমটি একটি সক্রিয় সাইট ক্যাটালিটিক ট্রায়াড সহ সাবটিলিসিন পরিবারের অন্তর্গত (Asp39-তার69-সের224)ক্লিভেজের প্রধান স্থান হল অ্যালিফ্যাটিক এবং অ্যারোমেটিক অ্যামিনো অ্যাসিডের কার্বক্সিল গ্রুপের সংলগ্ন পেপটাইড বন্ধন যা ব্লক করা আলফা অ্যামিনো গ্রুপ রয়েছে।এটি সাধারণত তার বিস্তৃত নির্দিষ্টতার জন্য ব্যবহৃত হয়।এই প্রোটিনেস কে বিশেষভাবে এমএনজিএসের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।অন্যান্য প্রোটিনেস কে এর সাথে তুলনা করে, এতে একই এনজাইমেটিক কর্মক্ষমতা সহ আরও কম নিউক্লিক অ্যাসিড দূষণ রয়েছে, যা ডাউনস্ট্রিম এমএনজিএস প্রয়োগকে আরও ভালভাবে নিশ্চিত করতে পারে।
জমা শর্ত
2 বছরের জন্য 2-8℃
স্পেসিফিকেশন
| চেহারা | বর্ণহীন থেকে হালকা বাদামী তরল |
| কার্যকলাপ | ≥800 U/ml |
| প্রোটিন ঘনত্ব | ≥20 মিলিগ্রাম/মিলি |
| নিকসে | কোনোটিই শনাক্ত হয়নি |
| DNase | কোনোটিই শনাক্ত হয়নি |
| RNase | কোনোটিই শনাক্ত হয়নি |
বৈশিষ্ট্য
| ইসি নম্বর | 3.4.21.64(Tritirachium অ্যালবাম থেকে রিকম্বিন্যান্ট) |
| সমবৈদ্দুতিক বিন্দু | 7.81 |
| সর্বোত্তম পিএইচ | 7.0- 12.0 চিত্র 1 |
| সর্বোত্তম তাপমাত্রা | 65 ℃ চিত্র 2 |
| pH স্থিতিশীলতা | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 h) চিত্র 3 |
| তাপ - মাত্রা সহনশীল | 50 ℃ নীচে (pH 8.0, 30 মিনিট) চিত্র 4 |
| স্টোরেজ স্থায়িত্ব | 25 ℃ এ 12 মাসের জন্য 90% এর বেশি কার্যকলাপ |
| অ্যাক্টিভেটর | এসডিএস, ইউরিয়া |
| ইনহিবিটরস | ডাইসোপ্রোপাইল ফ্লুরোফসফেট;ফেনাইলমেথাইলসালফোনাইল ফ্লোরাইড |
অ্যাপ্লিকেশন
1. জেনেটিক ডায়াগনস্টিক কিট
2. আরএনএ এবং ডিএনএ নিষ্কাশন কিট
3. টিস্যু থেকে নন-প্রোটিন উপাদান নিষ্কাশন, প্রোটিনের অমেধ্যের অবক্ষয়, যেমন ডিএনএভ্যাকসিন এবং হেপারিন প্রস্তুতি
4. স্পন্দিত ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা ক্রোমোজোম ডিএনএ তৈরি করা
5. ওয়েস্টার্ন ব্লট
6. এনজাইমেটিক গ্লাইকোসিলেটেড অ্যালবুমিন বিকারক ইন ভিট্রো ডায়াগনোসিস
সতর্কতা
ব্যবহার বা ওজন করার সময় প্রতিরক্ষামূলক গ্লাভস এবং গগলস পরুন এবং ব্যবহারের পরে ভালভাবে বায়ুচলাচল রাখুন।এই পণ্যটি ত্বকের এলার্জি প্রতিক্রিয়া এবং গুরুতর চোখের জ্বালা হতে পারে।যদি শ্বাস নেওয়া হয় তবে এটি অ্যালার্জি বা হাঁপানির লক্ষণ বা ডিসপনিয়া হতে পারে।শ্বাসযন্ত্রের জ্বালা হতে পারে।
ইউনিট সংজ্ঞা
এক ইউনিট (U) কে 1 μmol তৈরি করতে কেসিন হাইড্রোলাইজ করার জন্য প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়নিম্নলিখিত শর্তে প্রতি মিনিটে টাইরোসিন।
রিএজেন্ট প্রস্তুতি
বিকারক I: 1g মিল্ক কেসিন 0.1M সোডিয়াম ফসফেট দ্রবণ (pH 8.0) এর 50ml মধ্যে দ্রবীভূত করা হয়েছিল, 15মিনিটের জন্য 65-70 ℃ জলে ঢেকে রাখা হয়েছিল, নাড়া ও দ্রবীভূত করা হয়েছিল, জল দ্বারা ঠান্ডা করা হয়েছিল, সোডিয়াম হাইড্রোক্সাইড দ্বারা pH 8.0 ভলিউমে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল, এবং 100 মিলি।
বিকারক II: 0.1M ট্রাইক্লোরোএসেটিক অ্যাসিড, 0.2M সোডিয়াম অ্যাসিটেট, 0.3M অ্যাসিটিক অ্যাসিড।
বিকারক III: 0.4M Na2CO3সমাধান
বিকারক IV: ফরিন্ট বিকারক 5 বার বিশুদ্ধ জল দিয়ে মিশ্রিত করা হয়।
রিএজেন্ট V: এনজাইম তরল: 0.1M সোডিয়াম ফসফেট দ্রবণ (pH 8.0)।
বিকারক VI: টাইরোসিন দ্রবণ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml টাইরোসিন 0.2 দিয়ে দ্রবীভূতএম এইচসিএল।
পদ্ধতি
1. 0.5 মিলি বিকারক I 37 ℃ এ পূর্ব-উষ্ণ করা হয়, 0.5 মিলি এনজাইম দ্রবণ যোগ করুন, ভালভাবে মেশান, এবং ফুঁকুন10 মিনিটের জন্য 37℃।
2. প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে 1 মিলি বিকারক II যোগ করুন, ভালভাবে মিশ্রিত করুন এবং 30 মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন চালিয়ে যান।
3. সেন্ট্রিফিউগেট প্রতিক্রিয়া সমাধান।
4. 0.5 মিলি সুপারন্যাট্যান্ট নিন, 2.5 মিলি বিকারক III, 0.5 মিলি বিকারক IV যোগ করুন, ভালভাবে মেশান এবং 37 ℃ তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করুন30 মিনিটের জন্য।
5. OD660OD হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল1;ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ: 0.5ml বিকারক V এনজাইম প্রতিস্থাপন করতে ব্যবহৃত হয়OD নির্ধারণের সমাধান660OD হিসাবে2, ΔOD=OD1-ওডি2.
6. L-টাইরোসিন স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা: 0.5mL ভিন্ন ঘনত্বের L-টাইরোসিন দ্রবণ, 2.5mL বিকারক III, 0.5mL রিএজেন্ট IV 5mL সেন্ট্রিফিউজ টিউবে, 37℃ এ 30মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন, OD সনাক্ত করুন660এল-টাইরোসিনের বিভিন্ন ঘনত্বের জন্য, তারপর প্রমিত বক্ররেখা Y=kX+b পাওয়া যায়, যেখানে Y হল L-টাইরোসিন ঘনত্ব, X হল OD600.
হিসাব
2: প্রতিক্রিয়া সমাধানের মোট আয়তন (mL)
0.5: এনজাইম দ্রবণের আয়তন (mL)
0.5: ক্রোমোজেনিক নির্ধারণে ব্যবহৃত প্রতিক্রিয়া তরল পরিমাণ (mL)
10: প্রতিক্রিয়ার সময় (মিনিট)
Df: বহুবিধ পাতলা
C: এনজাইম ঘনত্ব (mg/mL)
তথ্যসূত্র
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77।
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.বায়োফিস।Res.কমুন(1971);44:513।
3. হিলজ, এইচ।et al.,ইউরো.জে. বায়োকেম।(1975);56:103-108।
4. সামব্রুক জেet আল।, আণবিক ক্লোনিং: একটি পরীক্ষাগার ম্যানুয়াল, ২য় সংস্করণ, কোল্ড স্প্রিং হারবারল্যাবরেটরি প্রেস, কোল্ড স্প্রিং হারবার (1989)।
পরিসংখ্যান
ডুমুর.1 সর্বোত্তম pH
100 মিমি বাফার সমাধান: pH6.0-8.0, না-ফসফেট;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH. এনজাইম ঘনত্ব: 1mg/mL
Fig.2 সর্বোত্তম তাপমাত্রা
20 মিমি কে-ফসফেট বাফার pH 8.0 এ প্রতিক্রিয়া।এনজাইমের ঘনত্ব: 1 মিগ্রা/মিলি
Fig.3 pH স্থিতিশীলতা
25 ℃, 50 মিমি বাফার সমাধান সহ 16 এইচ-ট্রিটমেন্ট: পিএইচ 4.5- 5.5, অ্যাসিটেট;পিএইচ 6.0-8.0, না-ফসফেট;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0- 12.5, Glycine-NaOH.এনজাইমের ঘনত্ব: 1 মিগ্রা/মিলি
Fig.4 তাপীয় স্থিতিশীলতা
50 মিমি ট্রিস-এইচসিএল বাফার, পিএইচ 8.0 সহ 30 মিনিট-চিকিত্সা।এনজাইমের ঘনত্ব: 1 মিগ্রা/মিলি
Fig.5 স্টোরেজ স্থিরty at 25℃
