মাল্টিপ্লেক্স ওয়ান স্টেপ RT-qPCR Premix-UNG
বিড়াল নম্বর: HCB5145A
মাল্টিপ্লেক্স ওয়ান স্টেপ আরটি-কিউপিসিআর প্রোব কিট (ইউডিজি প্লাস) হল টেমপ্লেট হিসাবে আরএনএর উপর ভিত্তি করে একটি মাল্টিপ্লেক্স পরিমাণগত পিসিআর কিট।পরীক্ষার প্রক্রিয়ায়, বিপরীত প্রতিলিপি এবং পরিমাণগত পিসিআর একই টিউবে বাহিত হয়েছিল, যা পরীক্ষামূলক ক্রিয়াকলাপকে সরলীকরণ করেছিল এবং দূষণের ঝুঁকি হ্রাস করেছিল।এই কিটটিতে, প্রথম স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ দক্ষতার সাথে তাপ-প্রতিরোধী বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ দ্বারা সংশ্লেষিত হয়েছিল এবং হটস্টার্ট ট্যাগ ডিএনএ পলিমারেজ দ্বারা পরিমাণগতভাবে পরিবর্ধিত হয়েছিল।কিটটিতে প্রধানত অপ্টিমাইজ করা এমপি বাফার, এনজাইম মিক্স ইত্যাদি থাকে। বাফার সলিউশনে ইতিমধ্যেই Mg রয়েছে2+এবং dNTP।এছাড়াও, যে উপাদানগুলি কার্যকরভাবে অ-নির্দিষ্ট PCR পরিবর্ধনকে বাধা দিতে পারে এবং একাধিক qPCR প্রতিক্রিয়াগুলির পরিবর্ধন দক্ষতার উন্নতি করতে পারে সেগুলি যুক্ত করা হয়েছে, যা পরিবর্ধন কার্যকারিতা নিশ্চিত করতে পারে এবং একাধিক পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া পর্যন্ত সম্পাদন করতে পারে।কার্যকরভাবে অ্যারোসল দূষণের ঝুঁকি প্রতিরোধ করতে dUTP/UDG সিস্টেম যুক্ত করা হয়েছিল।
উপাদান
1. বাফার
2. এনজাইম মিক্স
স্পেসিফিকেশন
| হট স্টার্ট | অন্তর্নির্মিত গরম শুরু |
| সনাক্তকরণ পদ্ধতি | প্রাইমার-প্রোব সনাক্তকরণ |
| পিসিআর পদ্ধতি | এক ধাপ RT-qPCR |
| পলিমারেজ | তাক ডিএনএ পলিমারেজ |
| নমুনার ধরন | ডিএনএ |
জমা শর্ত
পণ্যটি শুকনো বরফ দিয়ে পাঠানো হয় এবং 1 বছরের জন্য -25~-15℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।এটি ঘন ঘন এড়ানো উচিতফ্রিজ-থাওএটি আলাদাভাবে সংরক্ষণ করার সুপারিশ করা হয়।
নির্দেশনা
1.প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি
| উপাদান | আয়তন (μL) | চূড়ান্ত ঘনত্ব |
| 2 × এমপি বাফার | 12.5 | 1× |
| এনজাইম মিক্স | 1 | - |
| প্রাইমার/প্রোব মিক্স (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| টেমপ্লেট RNA | 1-10 | - |
| RNase ফ্রি H2O | 25 থেকে | - |
মন্তব্য:
ব্যবহারের আগে ভালভাবে মিশ্রিত করতে ভুলবেন না, হিংস্র কম্পনের কারণে অত্যধিক বুদবুদ এড়ান।
কপ্রাইমারের ঘনত্ব: মাল্টিপ্লেক্স প্রাইমার সহ প্রাইমার মিক্স, পরিস্থিতির উপর নির্ভর করে সর্বোত্তম প্রাইমার ঘনত্ব 0.l এবং 1.0μM এর মধ্যে হতে পারে।
খ.প্রোবের ঘনত্ব: মাল্টিপ্লেক্স প্রোব লেবেলিং পার্থক্য ফ্লুরোসেন্ট গ্রুপ সহ প্রোবের মিশ্রণ, পরিস্থিতির উপর নির্ভর করে সর্বোত্তম প্রোবের ঘনত্ব 0.05 এবং 0.5μM এর মধ্যে হতে পারে।
গ.টেমপ্লেট পাতলা করা: qPCR অত্যন্ত সংবেদনশীল এবং এটি টেমপ্লেট পাতলা করার সুপারিশ করা হয়।নিয়ন্ত্রণ Ct মান 20 এবং 35 এর মধ্যে উপযুক্ত।
dসিস্টেম প্রস্তুতি: অনুগ্রহ করে অতি পরিচ্ছন্ন কাজের টেবিলে প্রস্তুত করুন এবং নিউক্লিজ অবশিষ্টাংশ ছাড়া পাইপেটর এবং প্রতিক্রিয়া টিউব;ফিল্টার উপাদান সহ বন্দুকের মাথা ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়।ক্রস দূষণ এবং এরোসল দূষণ এড়িয়ে চলুন।
2. অপ্টিমাইজড সাইক্লিংপ্রোটোকল
| সাইকেল পদক্ষেপ | টেম্প | সময় | চক্র |
| বিপরীত প্রতিলিপি | 50℃ক | 20 মিনিট | 1 |
| ইনিশিয়াল-ডিনাচুরেশন | 95℃ | 5 মিনিট | 1 |
| পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া | 95℃ | 15 সেকেন্ড |
40-45 |
| 60℃ b | 30 সেকেন্ড c |
মন্তব্য:
কবিপরীত প্রতিলিপি: তাপমাত্রা 42°C বা 50°C নির্বাচন করতে পারে।
খ.পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া: পরিকল্পিত প্রাইমারের Tm মান অনুযায়ী তাপমাত্রা সামঞ্জস্য করা হয়।
গ.ফ্লুরোসেন্স সংকেত অধিগ্রহণ: যন্ত্র ম্যানুয়াল প্রয়োজনীয়তা অনুযায়ী পরীক্ষামূলক পদ্ধতি সেট করুন.
মন্তব্য
আপনার স্বাস্থ্য এবং নিরাপত্তা নিশ্চিত করতে অনুগ্রহ করে প্রয়োজনীয় PPE, যেমন ল্যাব কোট এবং গ্লাভস পরিধান করুন।
