মাউস জিনোটাইপিং কিট
বিড়াল নম্বর: HCR2021A
এই পণ্যটি ডিএনএ ক্রুড এক্সট্রাকশন এবং পিসিআর অ্যামপ্লিফিকেশন সিস্টেম সহ মাউস জিনোটাইপগুলির দ্রুত সনাক্তকরণের জন্য ডিজাইন করা একটি কিট।লাইসিস বাফার এবং প্রোটিনেজ কে দ্বারা সহজ ক্লিভেজ করার পরে মাউসের লেজ, কান, পায়ের আঙ্গুল এবং অন্যান্য টিস্যু থেকে সরাসরি পিসিআর পরিবর্ধনের জন্য পণ্যটি ব্যবহার করা যেতে পারে।রাতারাতি হজম হয় না, ফেনল-ক্লোরোফর্ম নিষ্কাশন বা কলাম বিশুদ্ধকরণ, যা সহজ এবং পরীক্ষা-নিরীক্ষার সময় কমিয়ে দেয়।পণ্যটি 2kb পর্যন্ত টার্গেট ফ্র্যাগমেন্ট এবং 3 জোড়া প্রাইমার সহ মাল্টিপ্লেক্স পিসিআর প্রতিক্রিয়ার জন্য উপযুক্ত।2×মাউস টিস্যু ডাইরেক্ট পিসিআর মিক্সে রয়েছে জেনেটিকালি ইঞ্জিনিয়ারড ডিএনএ পলিমারেজ, এমজি2+, dNTPs এবং একটি অপ্টিমাইজড বাফার সিস্টেম উচ্চ পরিবর্ধন দক্ষতা এবং প্রতিরোধক সহনশীলতা প্রদান করে, যাতে PCR প্রতিক্রিয়াগুলি টেমপ্লেট এবং প্রাইমার যোগ করে এবং পণ্যটিকে 1× এ রিহাইড্রেট করে চালানো যায়।এই পণ্যটির সাথে পরিবর্ধিত PCR পণ্যটির 3′ প্রান্তে একটি বিশিষ্ট "A" বেস রয়েছে এবং এটি পরিশোধনের পরে TA ক্লোনিংয়ের জন্য সরাসরি ব্যবহার করা যেতে পারে।
উপাদান
| উপাদান | আকার |
| 2×মাউস টিস্যু ডাইরেক্ট পিসিআর মিক্স | 5×1.0mL |
| লাইসিস বাফার | 2×20mL |
| প্রোটিনেস কে | 800μL |
জমা শর্ত
পণ্যগুলি 2 বছরের জন্য -25~-15℃ এ সংরক্ষণ করা উচিত।গলানোর পরে, লাইসিস বাফারকে 2~8℃-এ স্বল্প-মেয়াদী একাধিক ব্যবহারের জন্য সংরক্ষণ করা যেতে পারে এবং ব্যবহার করার সময় ভালভাবে মেশান।
আবেদন
এই পণ্যটি মাউস নকআউট বিশ্লেষণ, ট্রান্সজেনিক সনাক্তকরণ, জিনোটাইপিং এবং এর জন্য উপযুক্ত।
বৈশিষ্ট্য
1.সহজ অপারেশন: জিনোমিক ডিএনএ বের করার দরকার নেই;
2.প্রশস্ত প্রয়োগ: বিভিন্ন মাউস টিস্যু সরাসরি পরিবর্ধন জন্য উপযুক্ত.
নির্দেশনা
1.জিনোমিক ডিএনএ রিলিজ
1) লাইসেট প্রস্তুতি
টিস্যু লাইসেট লাইসেট করা মাউসের নমুনার সংখ্যা অনুসারে প্রস্তুত করা হয় (ডোজ অনুযায়ী টিস্যু লাইসেট সাইটে প্রস্তুত করা উচিত এবং ব্যবহারের জন্য পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করা উচিত), এবং একটি একক নমুনার জন্য প্রয়োজনীয় রিএজেন্টগুলির অনুপাত নিম্নরূপ:
| উপাদান | আয়তন (μL) |
| প্রোটিনেস কে | 4 |
| লাইসিস বাফার | 200 |
2) নমুনা প্রস্তুতি এবং Lysis
প্রস্তাবিত টিস্যু ব্যবহার
| ধরণটিস্যু | প্রস্তাবিত ভলিউম |
| ইঁদুরের লেজ | 1-3 মিমি |
| ইঁদুরের কান | 2-5 মিমি |
| ইঁদুরের পায়ের আঙুল | 1-2 টুকরা |
পরিষ্কার সেন্ট্রিফিউজ টিউবগুলিতে উপযুক্ত পরিমাণে মাউস টিস্যুর নমুনা নিন, প্রতিটি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 200μL টাটকা টিস্যু লাইসেট যোগ করুন, ঘূর্ণি এবং ঝাঁকান, তারপর 30 মিনিটের জন্য 55 ℃ এ ইনকিউবেট করুন এবং তারপর 3 মিনিটের জন্য 98 ℃ তাপমাত্রায় তাপ দিন।
3) সেন্ট্রিফিউগেশন
5 মিনিটের জন্য 12,000 rpm-এ লাইসেটটি ভালভাবে ঝাঁকান এবং সেন্ট্রিফিউজ করুন।সুপারনাট্যান্ট পিসিআর পরিবর্ধনের জন্য টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।স্টোরেজের জন্য টেমপ্লেটের প্রয়োজন হলে, সুপারনাট্যান্টটিকে অন্য জীবাণুমুক্ত সেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তর করুন এবং -20℃-এ 2 সপ্তাহের জন্য সংরক্ষণ করুন।
2.পিসিআর পরিবর্ধন
-20℃ থেকে 2×মাউস টিস্যু ডাইরেক্ট পিসিআর মিক্সটি সরান এবং বরফের উপর গলান, উল্টে মেশান এবং নিম্নলিখিত টেবিল অনুসারে পিসিআর প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রস্তুত করুন (বরফের উপর কাজ করুন):
| উপাদান | 25μLপদ্ধতি | 50μLপদ্ধতি | চূড়ান্ত ঘনত্ব |
| 2×মাউস টিস্যু ডাইরেক্ট পিসিআর মিক্স | 12.5μL | 25μL | 1× |
| প্রাইমার 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| প্রাইমার 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| বিভাজক পণ্যa | প্রয়োজন অনুযায়ী | প্রয়োজন অনুযায়ী |
|
| ডিডিএইচ2O | 25μL পর্যন্ত | 50μL পর্যন্ত |
|
বিঃদ্রঃ:
ক) যোগ করা পরিমাণ সিস্টেমের 1/10 এর বেশি হওয়া উচিত নয় এবং যদি খুব বেশি যোগ করা হয় তবে পিসিআর প্রশস্তকরণ বাধাগ্রস্ত হতে পারে।
প্রস্তাবিত পিসিআর শর্তাবলী
| সাইকেল ধাপ | টেম্প | সময় | চক্র |
| প্রাথমিক বিকৃতকরণ | 94℃ | 5 মিনিট | 1 |
| বিকৃতকরণ | 94℃ | 30 সেকেন্ড | 35-40 |
| অ্যানিলিংa | Tm+3~5℃ | 30 সেকেন্ড | |
| এক্সটেনশন | 72℃ | 30 সেকেন্ড/কেবি | |
| চূড়ান্ত এক্সটেনশন | 72℃ | 5 মিনিট | 1 |
| - | 4℃ | রাখা | - |
বিঃদ্রঃ:
ক) অ্যানিলিং তাপমাত্রা: প্রাইমারের Tm মানের রেফারেন্সে, প্রাইমারের ছোট Tm মান +3~5℃ এ অ্যানিলিং তাপমাত্রা সেট করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
সাধারণ সমস্যা এবং সমাধান
1.কোনো টার্গেটেড স্ট্রিপ নেই
1) অত্যধিক lysis পণ্য.টেমপ্লেটের সবচেয়ে উপযুক্ত পরিমাণ চয়ন করুন, সাধারণত সিস্টেমের 1/10 এর বেশি নয়;
2) খুব বড় নমুনা আকার.lysate 10 বার পাতলা করুন এবং তারপর প্রশস্ত করুন, বা নমুনার আকার এবং পুনরায় lysis হ্রাস করুন;
3) টিস্যুর নমুনা তাজা নয়।এটি তাজা টিস্যু নমুনা ব্যবহার করার সুপারিশ করা হয়;
4) দরিদ্র প্রাইমার গুণমান.প্রাইমারের গুণমান যাচাই করতে এবং প্রাইমার ডিজাইনকে অপ্টিমাইজ করতে পরিবর্ধনের জন্য জিনোমিক ডিএনএ ব্যবহার করুন।
2.অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন
1) অ্যানিলিং তাপমাত্রা খুব কম এবং চক্র সংখ্যা খুব বেশি।অ্যানিলিং তাপমাত্রা বৃদ্ধি এবং চক্র সংখ্যা হ্রাস;
2) টেমপ্লেট ঘনত্ব খুব বেশি।টেমপ্লেটের পরিমাণ হ্রাস করুন বা পরিবর্ধনের পরে 10 বার টেমপ্লেটটি পাতলা করুন;
3) দরিদ্র প্রাইমার নির্দিষ্টতা।প্রাইমার ডিজাইন অপ্টিমাইজ করুন।
মন্তব্য
1.নমুনাগুলির মধ্যে ক্রস দূষণ এড়াতে, একাধিক নমুনা নেওয়ার সরঞ্জাম প্রস্তুত করা উচিত এবং বারবার ব্যবহারের প্রয়োজন হলে প্রতিটি নমুনার পরে 2% সোডিয়াম হাইপোক্লোরাইট দ্রবণ বা নিউক্লিক অ্যাসিড ক্লিনার দিয়ে সরঞ্জামগুলির পৃষ্ঠটি পরিষ্কার করা যেতে পারে।
2.এটি তাজা মাউস টিস্যু ব্যবহার করার সুপারিশ করা হয়, এবং পরিবর্ধন ফলাফল প্রভাবিত এড়াতে নমুনার পরিমাণ খুব বড় হওয়া উচিত নয়।
3.লাইসিস বাফারকে ঘন ঘন জমাট বাঁধা এড়াতে হবে, এবং স্বল্প-মেয়াদী একাধিক ব্যবহারের জন্য 2~8℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।কম তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হলে, বৃষ্টিপাত ঘটতে পারে, এবং ব্যবহারের আগে সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত করা আবশ্যক।
4.পিসিআর মিক্স ঘন ঘন জমাট বাঁধা এড়াতে হবে, এবং স্বল্পমেয়াদী বারবার ব্যবহারের জন্য 4℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
5.এই পণ্যটি শুধুমাত্র বৈজ্ঞানিক পরীক্ষামূলক গবেষণার জন্য এবং ক্লিনিকাল রোগ নির্ণয় বা চিকিৎসায় ব্যবহার করা উচিত নয়।
