ইউরাসিল ডিএনএ গ্লাইকোসিলেজ
Uracil-DNA Glycosylase (UNG বা UDG) হল E.coli-এর একটি রিকম্বিন্যান্ট ক্লোন যার আণবিক ওজন 25 kDa।এটি ইউরাসিল-যুক্ত সিঙ্গেল-স্ট্র্যান্ডেড এবং ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ থেকে মুক্ত ইউরাসিলের মুক্তিকে অনুঘটক করে এবং আরএনএর বিরুদ্ধে নিষ্ক্রিয়, এবং পিসিআর পরিবর্ধন পণ্যগুলির দূষণ রোধ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।কর্মের নীতিটি এই সত্যের উপর ভিত্তি করে যে যদি PCR বিক্রিয়ায় dUTP-এর পরিবর্তে dUTP করা হয় এবং DU ঘাঁটি সম্বলিত একটি PCR পরিবর্ধন পণ্য তৈরি করা হয়, তাহলে এনজাইমটি নির্বাচিতভাবে U ঘাঁটিগুলির গ্লাইকোসিডিক বন্ধনকে একক-স্ট্রেন্ডেড এবং ডাবল-স্ট্র্যান্ডে ভেঙে দিতে পারে। ডিএনএ এবং পিসিআর পরিবর্ধন পণ্যকে অবনমিত করে।
প্রস্তাবিত আবেদন
দূষণ প্রতিরোধ পরিবর্ধন
স্টোরেজ কন্ডিশন
দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াস, ব্যবহারের আগে ভালভাবে মিশ্রিত করা উচিত, ঘন ঘন জমাট বাঁধা এড়িয়ে চলুন।
স্টোরেজ বাফার
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, স্টেবিলাইজার, 50% গ্লিসারল।
ইউনিট সংজ্ঞা
37°C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার মধ্যে 1µg সিঙ্গল-স্ট্র্যান্ডেড DNA-এর dU বেসগুলিকে ক্ষয় করার জন্য প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণ হল 1 ইউনিট।
মান নিয়ন্ত্রণ
1.SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেটিক বিশুদ্ধতা 98% এর বেশি
2.পরিবর্ধন সংবেদনশীলতা, ব্যাচ থেকে ব্যাচ নিয়ন্ত্রণ, স্থিতিশীলতা
3.UNG এর 1U 2মিনিটের জন্য 50℃ এ চিকিত্সা করার পরে, 103 কপির নিচে U ধারণকারী টেমপ্লেটটি সম্পূর্ণরূপে অবনমিত করা উচিত এবং কোন পরিবর্ধন পণ্য তৈরি করা যাবে না।
4.কোন বহিরাগত নিউক্লিয়াস কার্যকলাপ
নির্দেশনা
| উপাদান | আয়তন (μL) | চূড়ান্ত ঘনত্ব |
| 10 × PCR বাফার (dNTP বিনামূল্যে, Mg²+বিনামূল্যে) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP প্রতিস্থাপন করুন) | - | 200-600 μM |
| 25 মিমি এমজিসিএল2 | 2-8 μL | 1-4 মিমি |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 ইউ |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × প্রাইমার মিক্সক | 2 | 1× |
| টেমপ্লেট | - | 1μg/প্রতিক্রিয়া |
| ddH₂O | 50 থেকে | - |
বিঃদ্রঃ: a: qPCR/qRT-PCR-এর জন্য ব্যবহার করা হলে, প্রতিক্রিয়া সিস্টেমে ফ্লুরোসেন্ট প্রোব যোগ করা উচিত।সাধারণত, 0.2 μM এর একটি চূড়ান্ত প্রাইমার ঘনত্ব ভাল ফলাফল দিতে পারে;প্রতিক্রিয়া কর্মক্ষমতা খারাপ হলে, প্রাইমারের ঘনত্ব 0.2-1 μM পরিসরে সামঞ্জস্য করা যেতে পারে।সাধারণত, প্রোবের ঘনত্ব 0.1-0.3 μM পরিসরে অপ্টিমাইজ করা হয়।প্রাইমার এবং প্রোবের সর্বোত্তম সমন্বয় খুঁজে পেতে ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্ট পরীক্ষা করা যেতে পারে।
মন্তব্য
1.UNG এনজাইম PCR পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়ার আগে প্রতিক্রিয়া সিস্টেম থেকে দূষিত dUTP পরিবর্ধন পণ্য অপসারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে, তারপর পণ্য দূষণের কারণে মিথ্যা-ইতিবাচক ফলাফল এড়াতে।
2.UNG এনজাইম-এর জন্য সর্বোত্তম তাপমাত্রা 2মিনিটের জন্য সাধারণত 50℃ হয়।নিষ্ক্রিয় অবস্থা 5 মিনিটের জন্য 95℃।
3.ঘন ঘন হিমায়িত-গলে যাওয়া এড়িয়ে চলুন, এবং বড় তাপমাত্রার ওঠানামার সংস্পর্শে আসবেন না।
4.বিবর্ধিত করা বিভিন্ন জিনগুলির dUTP-এর বিভিন্ন ব্যবহার দক্ষতা এবং UNG এনজাইমের সংবেদনশীলতা রয়েছে, তাই, যদি UNG সিস্টেমের ব্যবহার সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা হ্রাসের দিকে পরিচালিত করে, প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি সামঞ্জস্য এবং অপ্টিমাইজ করা উচিত, যদি আপনার প্রযুক্তিগত সহায়তার প্রয়োজন হয়, অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুন আমাদের প্রতিষ্ঠান.
