সুপারস্টার্ট qPCR প্রিমিক্স প্লাস-ইউএনজি
বিড়াল নম্বর: HCB5071E
সুপারস্টার্ট qPCR প্রিমিক্স প্লাস-ইউএনজি হল একটি বিশেষ বিকারক যা রিয়েল টাইম পিসিআর গুণগত এবং পরিমাণগত প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য প্রোব-ভিত্তিক সনাক্তকরণ ব্যবহার করে ডিজাইন করা হয়েছে, বিশেষত লাইওফিলাইজেশন প্রক্রিয়াগুলির জন্য তৈরি করা হয়েছে।এটিতে একটি অভিনব হট-স্টার্ট এনজাইম Hotstart Taq plus (DG) রয়েছে, যার Taq এনজাইম কার্যকলাপ ঘরের তাপমাত্রায় সীলমোহরযুক্ত, কার্যকরভাবে প্রাইমার অ-নির্দিষ্ট অ্যানিলিং বা প্রাইমার ডাইমার গঠনের কারণে সৃষ্ট অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধনকে বাধা দেয় নিম্ন তাপমাত্রার পরিস্থিতিতে, এইভাবে উন্নতি করে। পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়ার নির্দিষ্টতা।এই বিকারকটি একটি অপ্টিমাইজ করা qPCR নির্দিষ্ট বাফার এবং UNG/dUTP অ্যান্টি-কন্টামিনেশন সিস্টেম ব্যবহার করে দ্রুত হট-স্টার্টিং অর্জন করে, কিউপিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলির দক্ষতা এবং সংবেদনশীলতাকে ব্যাপকভাবে উন্নত করে।এটি বিস্তৃত পরিমান পরিসরে ভাল মান বক্ররেখা পেতে পারে এবং সঠিকভাবে পরিমাপ সম্পাদন করতে পারে, কার্যকরভাবে অবশিষ্ট পিসিআর পণ্য বা এরোসল দূষণের কারণে মিথ্যা ইতিবাচক পরিবর্ধন প্রতিরোধ করে।এই বিকারকটি অ্যাপ্লায়েড বায়োসিস্টেম, এপেনডর্ফ, বায়ো-র্যাড এবং রোচে ইত্যাদি নির্মাতাদের বেশিরভাগ ফ্লুরোসেন্ট পরিমাণগত পিসিআর যন্ত্রের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ এবং লাইওফিলাইজড আকারে ভাল স্থিতিশীলতা প্রদর্শন করে।
বিকারক রচনা
1. 5×HotstartPremix প্লাস-UNG (Mg2+বিনামূল্যে) (ডিজি)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×লাইওপ্রোটেক্ট্যান্ট (ঐচ্ছিক)
জমা শর্ত
-20℃ এ দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজ;3 মাস পর্যন্ত 4℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।ব্যবহার করার আগে ভালভাবে মেশান এবংপুনরাবৃত্তি এবং জমাকৃত thawing এড়িয়ে চলুন.
সাইক্লিং প্রোটোকল
| পদ্ধতি | টেম্প | সময় | সাইকেল |
| হজম | 50℃ | ২ মিনিট | 1 |
| পলিমারেজ অ্যাক্টিভেশন | 95℃ | 1~5 মিনিট | 1 |
| ডিনেচার | 95℃ | 10~20 সেকেন্ড | 40-50 |
| অ্যানিলিং এবং এক্সটেনশন | 56~64℃ | 20~60 সেকেন্ড | 40-50 |
qPCR তরল বিক্রিয়া Syস্টেম প্রস্তুতি
|
গঠন |
25µL ভলিউম |
50µL ভলিউম |
চূড়ান্ত ঘনত্ব |
| 5×হটস্টার্ট প্রিমিক্স প্লাস-ইউএনজি(এমজি2+বিনামূল্যে) (ডিজি) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250 মিমি এমজিসিএল2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 মিমি |
| 4×লাইওপ্রোটেক্ট্যান্ট1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×প্রাইমার-প্রোব মিক্স2 | 1µL | 2µL | 1× |
| টেমপ্লেট ডিএনএ3 | —— | —— | —— |
| ডিডিএইচ2O | 25µL পর্যন্ত | 50µL পর্যন্ত | —— |
1. প্রাইমারগুলির জন্য 0.2μM এর চূড়ান্ত ঘনত্ব সাধারণত ভাল ফলাফল দেয়;যখন প্রতিক্রিয়া কার্যক্ষমতা খারাপ হয়, প্রয়োজন অনুযায়ী 0.2-1μM পরিসরের মধ্যে প্রাইমারের ঘনত্ব সামঞ্জস্য করুন।সর্বোত্তম সংমিশ্রণ খুঁজে পেতে গ্রেডিয়েন্ট পরীক্ষার মাধ্যমে প্রোবের ঘনত্ব সাধারণত 0.1-0.3μM এর মধ্যে অপ্টিমাইজ করা হয়।
2. বিভিন্ন ধরনের টেমপ্লেটের মধ্যে থাকা টার্গেট জিনের অনুলিপি সংখ্যা পরিবর্তিত হয়;প্রয়োজন হলে, সর্বোত্তম টেমপ্লেট যোগ পরিমাণ নির্ধারণ করতে গ্রেডিয়েন্ট তরলীকরণ করা যেতে পারে।
3. এই সিস্টেম lyophilized করা যেতে পারে;যখন গ্রাহকরা হিমায়িত-শুকানোর প্রয়োজনীয়তা ছাড়াই এই সিস্টেমটি ব্যবহার করেন, 4×লাইওপ্রোটেক্ট্যান্ট বেছে বেছে যোগ করা যেতে পারে; যদি ফ্রিজ-শুকনো পণ্যের প্রয়োজন হয়, লিকুইড রিএজেন্ট পর্যায়ে পণ্যের কার্যকারিতা যাচাইয়ের সময়, লাইওফিলাইজড সিস্টেমের উপাদানগুলির সাথে সামঞ্জস্যতা নিশ্চিত করতে এটি অবশ্যই 4×লাইওপ্রোটেক্ট্যান্ট যোগ করতে হবে। এবং প্রভাব।
যখন সিস্টেম ব্যবহার করা হয়d ফ্রিজ-শুকানোর জন্য, প্রস্তুত পদ্ধতি as নিম্নলিখিত:
| গঠন | 25µL প্রতিক্রিয়া সিস্টেম |
| 5 ×HotstartPremix প্লাস-UNG (Mg2+বিনামূল্যে) (ডিজি) | 5µL |
| 250 মিমি এমজিসিএল2 | 0.45µL |
| 4×লাইওপ্রোটেক্ট্যান্ট | 6.25µL |
| 25×প্রাইমার-প্রোব মিক্স | 1µL |
| ডিডিএইচ2O | 18~20µL পর্যন্ত |
* যদি ফ্রিজ-শুকানোর জন্য অন্য সিস্টেমের প্রয়োজন হয়, অনুগ্রহ করে আলাদাভাবে পরামর্শ করুন।
লাইওফিলাইজেশন প্রক্রিয়াss
| পদ্ধতি | টেম্প | সময় | অবস্থা | চাপ |
| প্রি-ফ্রিজিং | 4℃ | 30 মিনিট | রাখা |
1 এটিএম |
| -50℃ | 60 মিনিট | কুলিং | ||
| -50℃ | 180 মিনিট | রাখা | ||
| প্রাথমিক শুকানো | -30℃ | 60 মিনিট | গরম করার |
চূড়ান্ত ভ্যাকুয়াম |
| -30℃ | 70 মিনিট | রাখা | ||
| সেকেন্ডারি শুকানো | 25℃ | 60 মিনিট | গরম করার |
চূড়ান্ত ভ্যাকুয়াম |
| 25℃ | 300 মিনিট | রাখা |
2. উপরের lyophilization প্রক্রিয়া শুধুমাত্র রেফারেন্স জন্য.বিভিন্ন পণ্যের ধরন এবং বিভিন্ন ফ্রিজ-ড্রায়ারের বিভিন্ন পরামিতি রয়েছে, তাই প্রকৃত অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা যেতে পারেব্যবহারের সময় শর্ত।
3. বিভিন্ন লাইওফিলাইজেশন প্রক্রিয়া লাইওফিলাইজডের বিভিন্ন ব্যাচের আকারের জন্য উপযুক্ত হতে পারেপণ্য, তাই পর্যাপ্ত পরীক্ষার বৈধতা সঞ্চালিত করা আবশ্যক যখন বড় আকারের উৎপাদনের জন্য ব্যবহার করা হয়।
লাইওফিলাইজ ব্যবহারের জন্য নির্দেশাবলীd পাউডার
1. সংক্ষিপ্তভাবে lyophilized পাউডার সেন্ট্রিফিউজ;
2. লাইওফিলাইজড পাউডারে নিউক্লিক অ্যাসিড টেমপ্লেট যোগ করুন এবং 25µL পর্যন্ত জল যোগ করুন;
3. সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা ভালভাবে মিশ্রিত করুন এবং মেশিনে চালান।
মান নিয়ন্ত্রণ:
1. কার্যকরী পরীক্ষা: সংবেদনশীলতা, নির্দিষ্টতা, qPCR এর প্রজননযোগ্যতা।
2. কোন বহিরাগত নিউক্লিয়াস কার্যকলাপ, কোন বহিরাগত endo/exonuclease দূষণ.
প্রযুক্তিগত তথ্য:
1. সুপারস্টার্ট qPCR প্রিমিক্স প্লাস-ইউএনজি একটি অভিনব হট-স্টার্ট এনজাইম ব্যবহার করে যা 1~5 মিনিটের মধ্যে দ্রুত হট-স্টার্টিং সক্ষম করে;বিশেষ বাফার গঠনের মাধ্যমে এটি মাল্টিপ্লেক্স ফ্লুরোসেন্ট পরিমাণগত পিসিআর প্রতিক্রিয়ার জন্য উপযুক্ত।
2. এটির উচ্চতর বিশেষত্ব রয়েছে যা উল্লেখযোগ্যভাবে ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর সীমা সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতাকে উন্নত করে, পরিবর্ধন বক্ররেখাকে স্বাভাবিক করে তোলে, ফ্লুরোসেন্স মান কম ঘনত্বের টেমপ্লেটগুলিতে সুস্পষ্ট উন্নতি লাভ করে, উচ্চ সংবেদনশীলতা ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর সনাক্তকরণ বিকারক হিসাবে উপযুক্ত।
3. কম অ্যানিলিং তাপমাত্রা বা 200bp এর চেয়ে বেশি লম্বা প্রাইমারগুলির জন্য, 3-পদক্ষেপ পদ্ধতি সুপারিশ করা হয়।
4. DUTP-এর ব্যবহার দক্ষতা এবং UNG এনজাইমের সংবেদনশীলতা বিভিন্ন টার্গেট জিনের জন্য আলাদা, এইভাবে UNG সিস্টেম ব্যবহার করলে সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা হ্রাস পায়, প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি সামঞ্জস্য এবং অপ্টিমাইজ করা উচিত।প্রযুক্তিগত সহায়তা প্রয়োজন হলে আমাদের কোম্পানির সাথে যোগাযোগ করুন.
5. পরিবর্ধনের আগে এবং পরে উত্সর্গীকৃত এলাকা এবং পাইপেট ব্যবহার করুন, অপারেশনের সময় গ্লাভস পরুন এবং ঘন ঘন প্রতিস্থাপন করুন;PCR পণ্য দ্বারা নমুনা দূষণ কমাতে PCR সমাপ্তির পরে প্রতিক্রিয়া টিউব খুলবেন না।
