ওয়াইল্ড তাক ডিএনএ পলিমারেজ
Taq DNA পলিমারেজ হল Thermus aquaticus YT-1 থেকে একটি থার্মোস্টেবল ডিএনএ পলিমারেজ, যার একটি 5′→3′ পলিমারেজ কার্যকলাপ এবং একটি 5´ ফ্ল্যাপ এন্ডোনিউক্লিজ কার্যকলাপ রয়েছে।
উপাদান
| উপাদান | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq বাফার | 2×1 মিলি | 2×10 মিলি | 2×50 মিলি | 5×200 মিলি |
| Taq DNA পলিমারেজ (5 U/μL) | 0.1 মিলি | 1 মি.লি | 5 মি.লি | 5×10 মিলি |
স্টোরেজ কন্ডিশন
0°C এর নিচে পরিবহন এবং -25°C~-15°C এ সংরক্ষণ করা হবে।
ইউনিট সংজ্ঞা
এক ইউনিটকে 75°C তাপমাত্রায় 30 মিনিটে অ্যাসিড অদ্রবণীয় পদার্থে 15 nmol dNTP এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়।
মান নিয়ন্ত্রণ
1.প্রোটিন বিশুদ্ধতা পরীক্ষা (SDS-PAGE):Taq DNA পলিমারেজের বিশুদ্ধতা ≥95% SDS-PAGE বিশ্লেষণ দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল।
2.Endonuclease কার্যকলাপ:37 ℃ তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য 1 μg λDNA সহ Taq DNA পলিমারেজের সর্বনিম্ন 5 U এর ফলে নির্ধারিত হিসাবে কোনও সনাক্তযোগ্য অবক্ষয় হয় না।
3.Exonuclease কার্যকলাপ:1 μg λ -হিন্দ Ⅲ ডিজেস্ট ডিএনএ 37 ℃ এ 16 ঘন্টার জন্য ন্যূনতম 5 U এর Taq DNA পলিমারেজের ফলে নির্ধারিত হিসাবে কোনও সনাক্তযোগ্য অবক্ষয় হয় না।
4.Nickase কার্যকলাপ:1 μg pBR322 DNA সহ 37°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য ন্যূনতম 5 U Taq DNA পলিমারেজের ফলে নির্ধারিত হিসাবে কোন সনাক্তকরণযোগ্য অবনতি হয় না।
5.RNase কার্যকলাপ:1.6 μg MS2 RNA সহ ন্যূনতম 5 U Taq DNA পলিমারেজ 37°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য নির্ধারন অনুযায়ী কোন শনাক্তযোগ্য অবনতি হয় না।
6.ই কোলাইডিএনএ:Taq DNA পলিমারেজের 5 U E. coli 16S rRNA লোকাসের জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার সহ TaqMan qPCR ব্যবহার করে E. coli জিনোমিক DNA-এর উপস্থিতির জন্য স্ক্রীন করা হয়।ই. কোলাই জিনোমিক ডিএনএ দূষণ হল ≤1 কপি।
7.PCR পরিবর্ধন (5.0 kb Lambda DNA)- একটি 50 μL বিক্রিয়া যার মধ্যে 5 ng Lambda DNA সহ 5 ইউনিট Taq DNA পলিমারেজের 25 চক্রের জন্য PCR পরিবর্ধনের ফলে প্রত্যাশিত 5.0 kb পণ্য পাওয়া যায়।
প্রতিক্রিয়া সেটআপ
| উপাদান | আয়তন |
| টেমপ্লেট ডিএনএa | ঐচ্ছিক |
| 10 μM ফরোয়ার্ড প্রাইমার | 1 μL |
| 10 μM বিপরীত প্রাইমার | 1 μL |
| dNTP মিক্স (10 মিমি প্রতিটি) | 1 μL |
| 10×Taq বাফার | 5 μL |
| তাক ডিএনএ পলিমারেজখ | 0.25 μL |
| নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল | 50 μL পর্যন্ত |
মন্তব্য:
1) বিভিন্ন টেমপ্লেটের সর্বোত্তম প্রতিক্রিয়া ঘনত্ব ভিন্ন।নিম্নলিখিত টেবিলটি 50 μL প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের প্রস্তাবিত টেমপ্লেট ব্যবহার দেখায়।
| ডিএনএ | পরিমাণ |
| জিনোমিক | 1 ng-1 μg |
| প্লাজমিড বা ভাইরাল | 1 pg-1 ng |
2) বিশেষায়িত অ্যাপ্লিকেশনগুলিতে Taq DNA পলিমারেজের সর্বোত্তম ঘনত্ব 0.25 µL~1 µL হতে পারে।
প্রতিক্রিয়াকার্যক্রম
| ধাপ | তাপমাত্রা(°সে) | সময় | চক্র |
| প্রাথমিক বিকৃতকরণa | 95 ℃ | 5 মিনিট | - |
| বিকৃতকরণ | 95 ℃ | 15-30 সেকেন্ড | 30-35 সাইকেল |
| অ্যানিলিংখ | 60 ℃ | 15 সেকেন্ড | |
| এক্সটেনশন | 72 ℃ | 1kb/মিনিট | |
| চূড়ান্ত এক্সটেনশন | 72 ℃ | 5 মিনিট | - |
মন্তব্য:
1) প্রাথমিক বিকৃতকরণ অবস্থা বেশিরভাগ পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়ার জন্য উপযুক্ত এবং টেমপ্লেট কাঠামোর জটিলতা অনুযায়ী সংশোধন করা যেতে পারে।যদি টেমপ্লেট গঠন জটিল হয়, প্রাক-ডিনাচুরেশন সময় 5 - 10 মিনিট পর্যন্ত বাড়ানো যেতে পারে প্রাথমিক বিকৃতকরণ প্রভাব উন্নত করতে।
2) অ্যানিলিং তাপমাত্রা প্রাইমারের Tm মান অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা প্রয়োজন, যা সাধারণত প্রাইমারের Tm মান থেকে 3~5 ℃ কম সেট করা হয়;জটিল টেমপ্লেটগুলির জন্য, দক্ষ পরিবর্ধন অর্জনের জন্য অ্যানিলিং তাপমাত্রা সামঞ্জস্য করা এবং এক্সটেনশন সময় প্রসারিত করা প্রয়োজন।
