প্রোটিনেস কে এনজিএস (পাউডার)
বিড়াল নম্বর: HC4507A
এনজিএস প্রোটিজ কে উচ্চ এনজাইম কার্যকলাপ এবং প্রশস্ত স্তরের নির্দিষ্টতা সহ একটি স্থিতিশীল সেরিন প্রোটিজ। এনজাইমটি হাইড্রোফোবিক অ্যামিনো অ্যাসিড, সালফারযুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিড এবং অ্যারোমেটিক অ্যামিনো অ্যাসিডের সি-টার্মিনালের সংলগ্ন এস্টার বন্ড এবং পেপটাইড বন্ডগুলিকে পছন্দ করে।সুতরাং, এটি প্রায়শই প্রোটিনকে ছোট পেপটাইডে পরিণত করতে ব্যবহৃত হয়।এনজিএস প্রোটিজ কে হল অ্যাএসপি সহ একটি সাধারণ সেরিন প্রোটিজ39-তার69-সের224অনুঘটক ট্রায়াড যা সেরিন প্রোটিসের জন্য অনন্য, এবং অনুঘটক কেন্দ্র টাও Ca দ্বারা বেষ্টিত2+স্থিতিশীলতার জন্য বাঁধাই সাইট, বিস্তৃত অবস্থার অধীনে উচ্চ এনজাইম কার্যকলাপ বজায় রাখা।
স্পেসিফিকেশন
| চেহারা | সাদা থেকে অফ-হোয়াইট নিরাকার পাউডার, lyophilized |
| নির্দিষ্ট কার্যকলাপ | ≥40U/mg কঠিন |
| DNase | কোনোটিই শনাক্ত হয়নি |
| RNase | কোনোটিই শনাক্ত হয়নি |
| বায়োবর্ডেন | ≤50CFU/g কঠিন |
| নিউক্লিক অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশ | <5pg/mg কঠিন |
বৈশিষ্ট্য
| উৎস | ট্রিটিরাচিয়াম অ্যালবাম |
| ইসি নম্বর | 3.4.21.64(Tritirachium অ্যালবাম থেকে রিকম্বিন্যান্ট) |
| আণবিক ভর | 29kDa (SDS-পৃষ্ঠা) |
| সমবৈদ্দুতিক বিন্দু | 7.81 চিত্র.1 |
| সর্বোত্তম পিএইচ | 7.0-12.0 (সকল উচ্চ কার্যকলাপ সম্পাদন করে) চিত্র.2 |
| সর্বোত্তম তাপমাত্রা | 65℃ চিত্র.3 |
| pH স্থিতিশীলতা | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) চিত্র.4 |
| তাপ - মাত্রা সহনশীল | 50℃ এর নিচে (pH 8.0, 30min) চিত্র.5 |
| স্টোরেজ স্থায়িত্ব | 12 মাসের জন্য 25℃ এ সংরক্ষণ করা হয়েছে চিত্র.6 |
| অ্যাক্টিভেটর | এসডিএস, ইউরিয়া |
| ইনহিবিটরস | ডাইসোপ্রোপাইল ফ্লুরোফসফেট;বেনজিলসলফোনাইল ফ্লোরাইড |
জমা শর্ত
লাইওফিলাইজড পাউডার -25~-15 ℃ এ দীর্ঘ সময়ের জন্য আলো থেকে দূরে সংরক্ষণ করুন;দ্রবীভূত হওয়ার পরে, আলো থেকে 2-8℃ দূরে স্বল্পমেয়াদী স্টোরেজের জন্য উপযুক্ত ভলিউম বা আলো থেকে দূরে -25~-15 ℃-এ দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজ।
সতর্কতা
ব্যবহার বা ওজন করার সময় প্রতিরক্ষামূলক গ্লাভস এবং গগলস পরুন এবং ব্যবহারের পরে ভালভাবে বায়ুচলাচল রাখুন।এই পণ্যটি ত্বকের এলার্জি প্রতিক্রিয়া এবং গুরুতর চোখের জ্বালা হতে পারে।যদি শ্বাস নেওয়া হয় তবে এটি অ্যালার্জি বা হাঁপানির লক্ষণ বা ডিসপনিয়া হতে পারে।শ্বাসযন্ত্রের জ্বালা হতে পারে।
ইউনিট সংজ্ঞা
NGS Protease K-এর একটি ইউনিটকে স্ট্যান্ডার্ড নির্ধারণের শর্তে কেসিনকে 1 μmol L-tyrosine-এ হাইড্রোলাইজ করার জন্য প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়।
রিএজেন্ট প্রস্তুতি
| বিকারক | প্রস্তুতকারক | ক্যাটালগ |
| কেসিন প্রযুক্তিগতগরুর দুধ থেকে | সিগমা অলড্রিচ | C7078 |
| NaOH | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| ট্রাইক্লোরোসেটিক অ্যাসিড | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| সোডিয়াম অ্যাসিটেট | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| এসিটিক এসিড | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| সোডিয়াম কার্বোনেট | সাইনোফার্ম কেমিক্যালReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| ফোলিন-ফেনল | সানগন বায়োটেক (সাংহাই)লিমিটেড কোং. | A500467-0100 |
| এল-টাইরোসিন | সিগমা | 93829 |
বিকারক I:
সাবস্ট্রেট: বোভাইন মিল্ক দ্রবণ থেকে 1% কেসিন: 0.1M সোডিয়াম ফসফেট দ্রবণ, pH 8.0 এর 50ml মধ্যে 1g বোভাইন মিল্ক কেসিন দ্রবীভূত করুন, 15 মিনিটের জন্য 65-70 ডিগ্রি সেলসিয়াসে জলের স্নানে তাপ করুন, নাড়ুন এবং দ্রবীভূত করুন, জল দিয়ে ঠান্ডা করুন, সামঞ্জস্য করুন সোডিয়াম হাইড্রক্সাইড pH 8.0, এবং 100ml তে পাতলা করুন।
বিকারক II:
TCA দ্রবণ: 0.1M ট্রাইক্লোরোএসেটিক অ্যাসিড, 0.2M সোডিয়াম অ্যাসিটেট এবং 0.3M অ্যাসিটিক অ্যাসিড (ওজন 1.64g ট্রাইক্লোরোএসেটিক অ্যাসিড + 1.64g সোডিয়াম অ্যাসিটেট + 1.724mL অ্যাসিটিক অ্যাসিড পরপর, 50mL ডিওনাইজড জল যোগ করুন, HC40 এর সাথে pH30 এর সাথে সমন্বয় করুন। 100 মিলি)।
বিকারক III:
0.4 মি সোডিয়াম কার্বনেট দ্রবণ (4.24 গ্রাম অ্যানহাইড্রাস সোডিয়াম কার্বনেটের ওজন এবং 100 মিলি জলে দ্রবীভূত হয়)
বিকারক IV:
ফোলিন ফেনল বিকারক: ডিওনাইজড জল দিয়ে 5 বার পাতলা করুন।
বিকারক V:
এনজাইম মিশ্রিত: 0.1 এম সোডিয়াম ফসফেট দ্রবণ, পিএইচ 8.0।
বিকারক VI:
এল-টাইরোসিন স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine 0.2M HCl দিয়ে দ্রবীভূত।
পদ্ধতি
1. UV-Vis স্পেকট্রোফটোমিটার চালু করুন এবং ফটোমেট্রিক পরিমাপ নির্বাচন করুন।
2. তরঙ্গদৈর্ঘ্য 660nm হিসাবে সেট করুন।
3. জল স্নান চালু করুন, তাপমাত্রা 37℃ সেট করুন, 3-5 মিনিটের জন্য তাপমাত্রা অপরিবর্তিত নিশ্চিত করুন৷
4. একটি 2mL সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 0.5mL সাবস্ট্রেট 37℃ জল স্নানে 10 মিনিটের জন্য প্রিহিট করুন।
5. 10 মিনিটের জন্য প্রিহিটেড সেন্ট্রিফিউজ টিউবে 0.5mL মিশ্রিত এনজাইম দ্রবণ বের করুন।ফাঁকা গ্রুপ হিসাবে এনজাইম diluent সেট করুন.
6. প্রতিক্রিয়ার পরপরই 1.0 mL TCA বিকারক যোগ করুন।ভালভাবে মিশ্রিত করুন এবং 30 মিনিটের জন্য জল স্নানে সেঁকুন।
7. সেন্ট্রিফিউগেট প্রতিক্রিয়া সমাধান।
8. নির্দিষ্ট ক্রমে নিম্নলিখিত উপাদান যোগ করুন.
| বিকারক | আয়তন |
| সুপারনেট্যান্ট | 0.5 মিলি |
| 0.4M সোডিয়াম কার্বনেট | 2.5 মিলি |
| ফোলিন ফেনল বিকারক | 0.5 মিলি |
9. 30 মিনিটের জন্য 37 ℃ জলের স্নানে incubating আগে ভালভাবে মিশ্রিত করুন।
10. OD660OD হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল1;ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ: এনজাইম দ্রবণ প্রতিস্থাপন করতে এনজাইম দ্রবণ ব্যবহার করা হয় OD নির্ধারণ করতে660OD হিসাবে2, ΔOD=OD1-ওডি2.
11. এল-টাইরোসিন স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা: 0.5mL ভিন্ন ঘনত্ব এল-টাইরোসিন দ্রবণ, 2.5mL 0.4M সোডিয়াম কার্বনেট, 0.5mL ফোলিন ফেনল বিকারক 5mL সেন্ট্রিফিউজ টিউবে, 37℃ এ 30মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন, OD সনাক্ত করুন660এল-টাইরোসিনের বিভিন্ন ঘনত্বের জন্য, তারপর প্রমিত বক্ররেখা Y=kX+b পাওয়া যায়, যেখানে Y হল L-টাইরোসিন ঘনত্ব, X হল OD600.
হিসাব
2: প্রতিক্রিয়া সমাধানের মোট আয়তন (mL)
0.5: এনজাইম দ্রবণের আয়তন (mL)
0.5: ক্রোমোজেনিক নির্ধারণে ব্যবহৃত প্রতিক্রিয়া তরল পরিমাণ (mL)
10: প্রতিক্রিয়ার সময় (মিনিট)
Df: বহুবিধ পাতলা
C: এনজাইম ঘনত্ব (mg/mL)
পরিসংখ্যান
চিত্র.1 ডিএনএ অবশিষ্টাংশ
| নমুনা | Ave C4 | নিউক্লিক এসিড পুনরুদ্ধার (pg/mg) | পুনরুদ্ধার (%) | মোট নিউক্লিক অ্যাসিড ( pg/mg) |
| পিআরকে | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-মুক্ত H2O | অনির্ধারিত | - | - | - |
Fig.2 সর্বোত্তম pH
Fig.3 সর্বোত্তম তাপমাত্রা
Fig.4 pH স্থায়িত্ব
Fig.5 তাপীয় স্থিতিশীলতা
Fig.6 25℃ এ স্টোরেজ স্থায়িত্ব
