প্রোটিনেস কে (তরল)
বিড়াল নম্বর: HC4502A
প্রোটিনেস কে একটি স্থিতিশীল সেরিন প্রোটিস যার বিস্তৃত স্তরের নির্দিষ্টতা রয়েছে।এমনকি ডিটারজেন্টের উপস্থিতিতেও এটি স্থানীয় অবস্থায় অনেক প্রোটিনকে ক্ষয় করে।স্ফটিক এবং আণবিক গঠন অধ্যয়ন থেকে প্রমাণ পাওয়া যায় যে এনজাইমটি একটি সক্রিয় সাইট ক্যাটালিটিক ট্রায়াড সহ সাবটিলিসিন পরিবারের অন্তর্গত (Asp39-তার69- সার্224)ক্লিভেজের প্রধান স্থান হল অ্যালিফ্যাটিক এবং অ্যারোমেটিক অ্যামিনো অ্যাসিডের কার্বক্সিল গ্রুপের সংলগ্ন পেপটাইড বন্ধন যা ব্লক করা আলফা অ্যামিনো গ্রুপ রয়েছে।এটি সাধারণত তার বিস্তৃত জন্য ব্যবহৃত হয়নির্দিষ্টতা
স্পেসিফিকেশন
| চেহারা | বর্ণহীন থেকে হালকা বাদামী তরল |
| কার্যকলাপ | ≥800 U/ml |
| প্রোটিন ঘনত্ব | ≥20 মিলিগ্রাম/মিলি |
| DNase | কোনোটিই শনাক্ত হয়নি |
| RNase | কোনোটিই শনাক্ত হয়নি |
জমা শর্ত
2-8 ℃ তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন।
বৈশিষ্ট্য
| ইসি নম্বর | 3.4.21.64 (আরTritirachium অ্যালবাম থেকে ecombinant) |
| আণবিক ভর | 29 kDa (SDS-পৃষ্ঠা) |
| সমবৈদ্দুতিক বিন্দু | 7.81 |
| সর্বোত্তম পিএইচ | 7.0-12.0 চিত্র.1 |
| সর্বোত্তম তাপমাত্রা | 65 ℃ Fig.2 |
| pH স্থিতিশীলতা | pH 4.5-12.5 (25℃, 16 h) চিত্র.3 |
| তাপ - মাত্রা সহনশীল | 50℃ নীচে (pH 8.0, 30 মিনিট) চিত্র.4 |
| অ্যাক্টিভেটর | এসডিএস, ইউরিয়া |
| ইনহিবিটরস | ডাইসোপ্রোপাইল ফ্লুরোফসফেট;ফেনাইলমেথাইলসালফোনাইল ফ্লোরাইড |
অ্যাপ্লিকেশন
1. জেনেটিক ডায়াগনস্টিক কিট
2. আরএনএ এবং ডিএনএ নিষ্কাশন কিট
3. টিস্যু থেকে নন-প্রোটিন উপাদান নিষ্কাশন, প্রোটিন অমেধ্যের অবক্ষয়, যেমন ডিএনএ ভ্যাকসিন এবং হেপারিন তৈরি
4. স্পন্দিত ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা ক্রোমোজোম ডিএনএ তৈরি করা
5. ওয়েস্টার্ন ব্লট
6. এনজাইমেটিক গ্লাইকোসিলেটেড অ্যালবুমিন বিকারক ইন ভিট্রো ডায়াগনোসিস
সতর্কতা
ব্যবহার বা ওজন করার সময় প্রতিরক্ষামূলক গ্লাভস এবং গগলস পরুন এবং ব্যবহারের পরে ভালভাবে বায়ুচলাচল রাখুন।এই পণ্যটি ত্বকের এলার্জি প্রতিক্রিয়া এবং গুরুতর চোখের জ্বালা হতে পারে।যদি শ্বাস নেওয়া হয় তবে এটি অ্যালার্জি বা হাঁপানির লক্ষণ বা ডিসপনিয়া হতে পারে।শ্বাসযন্ত্রের জ্বালা হতে পারে।
অ্যাস
ইউনিট সংজ্ঞা
নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে প্রতি মিনিটে 1 μmol টাইরোসিন তৈরি করতে কেসিন হাইড্রোলাইজ করার জন্য প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে এক ইউনিট (U) সংজ্ঞায়িত করা হয়।
রিএজেন্ট প্রস্তুতি
বিকারক I: 1g মিল্ক কেসিন 50ml 0.1M সোডিয়াম ফসফেট দ্রবণে (pH 8.0) দ্রবীভূত করা হয়েছিল, 15মিনিটের জন্য 65-70 ℃ জলে ইনকিউব করা হয়েছিল, নাড়া ও দ্রবীভূত করা হয়েছিল, জল দ্বারা ঠান্ডা করা হয়েছিল, সোডিয়াম হাইড্রক্সাইড দ্বারা pH8.0 এর সাথে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল এবং ঠিক করা হয়েছিল ভলিউম 100 মিলি।
বিকারক II: TCA সমাধান: 0.1M ট্রাইক্লোরোএসেটিক অ্যাসিড, 0.2M সোডিয়াম অ্যাসিটেট, 0.3M অ্যাসিটিক অ্যাসিড।
বিকারক III: 0.4M Na2CO3সমাধান
বিকারক IV: ফরিন্ট বিকারক 5 বার বিশুদ্ধ জল দিয়ে মিশ্রিত করা হয়।
রিএজেন্ট V: এনজাইম তরল: 0.1M সোডিয়াম ফসফেট দ্রবণ (pH 8.0)।
রিএজেন্ট VI: টাইরোসিন দ্রবণ:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml টাইরোসিন 0.2M HCl দিয়ে দ্রবীভূত।
পদ্ধতি
1. 0.5 মিলি বিকারক I 37 ℃ পূর্বে উষ্ণ করা হয়, 0.5 মিলি এনজাইম দ্রবণ যোগ করুন, ভালভাবে মিশ্রিত করুন এবং 10 মিনিটের জন্য 37 ℃ এ ইনকিউবেট করুন।
2. প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে 1 মিলি বিকারক II যোগ করুন, ভালভাবে মিশ্রিত করুন এবং 30 মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন চালিয়ে যান।
3. সেন্ট্রিফিউগেট প্রতিক্রিয়া সমাধান।
4. 0.5ml সুপারন্যাট্যান্ট নিন, 2.5ml বিকারক III, 0.5ml বিকারক IV যোগ করুন, ভালভাবে মেশান এবং 37℃ তাপমাত্রায় 30মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন৷
5. OD660OD হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল1;ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠী: 0.5ml বিকারক V ব্যবহার করা হয় OD নির্ধারণের জন্য এনজাইম সমাধান প্রতিস্থাপন করতে660OD হিসাবে2, ΔOD=OD1-ওডি2.
6. L-টাইরোসিন স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা: 0.5mL ভিন্ন ঘনত্বের L-টাইরোসিন দ্রবণ, 2.5mL বিকারক III, 0.5mL রিএজেন্ট IV 5mL সেন্ট্রিফিউজ টিউবে, 37℃ এ 30মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন, OD সনাক্ত করুন660এল-টাইরোসিনের বিভিন্ন ঘনত্বের জন্য, তারপর প্রমিত বক্ররেখা Y=kX+b পাওয়া যায়, যেখানে Y হল L-টাইরোসিন ঘনত্ব, X হল OD600.
হিসাব
2: প্রতিক্রিয়া সমাধানের মোট আয়তন (mL)
0.5: এনজাইম দ্রবণের আয়তন (mL)
0.5: ক্রোমোজেনিক নির্ধারণে ব্যবহৃত প্রতিক্রিয়া তরল পরিমাণ (mL)
10: প্রতিক্রিয়ার সময় (মিনিট)
Df: বহুবিধ পাতলা
C: এনজাইম ঘনত্ব (mg/mL)
তথ্যসূত্র
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77।
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.বায়োফিস।Res.কমুন(1971);44:513।
3. হিলজ, এইচ।et al.,ইউরো.জে. বায়োকেম।(1975);56:103-108।
4. সামব্রুক জেet আল।, আণবিক ক্লোনিং: একটি ল্যাবরেটরি ম্যানুয়াল, ২য় সংস্করণ, কোল্ড স্প্রিং হারবার ল্যাবরেটরি প্রেস, কোল্ড স্প্রিং হারবার (1989)।
পরিসংখ্যান
ডুমুর. 1 সর্বোত্তম pH
100 মিমি বাফার সমাধান: pH6.0-8.0, না-ফসফেট;pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH. এনজাইম ঘনত্ব: 1mg/mL
চিত্র 2 সর্বোত্তম তাপমাত্রা
20mM কে-ফসফেট বাফার pH 8.0 এ প্রতিক্রিয়া।এনজাইম ঘনত্ব: 1mg/mL
চিত্র 3 pH স্থিতিশীলতা
25℃, 50mM বাফার দ্রবণ সহ 16 h-ট্রিটমেন্ট: pH 4.5-5.5, Acetate;পিএইচ 6.0-8.0, না-ফসফেট;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0-12.5, Glycine-NaOH.এনজাইম ঘনত্ব: 1mg/mL
চিত্র 4 তাপীয় স্থিতিশীলতা
50 মিমি ট্রিস-এইচসিএল বাফার, পিএইচ 8.0 সহ 30 মিনিট-চিকিত্সা।এনজাইম ঘনত্ব: 1mg/mL
চিত্র 5 স্টোরেজ স্থিরty at 25℃
