Rnase ইনহিবিটার
Murine RNase ইনহিবিটর হল একটি রিকম্বিন্যান্ট মুরিন RNase ইনহিবিটর যা E.coli থেকে প্রকাশিত এবং শুদ্ধ করা হয়।এটি অ-সমযোজী বন্ধনের মাধ্যমে 1:1 অনুপাতে RNase A, B বা C এর সাথে আবদ্ধ হয়, যার ফলে তিনটি এনজাইমের ক্রিয়াকলাপকে বাধা দেয় এবং RNA কে অবক্ষয় থেকে রক্ষা করে।যাইহোক, এটি Aspergillus থেকে RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H বা RNase এর বিরুদ্ধে কার্যকর নয়।Murine RNase ইনহিবিটার RT-PCR, RT-qPCR এবং IVT mRNA দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং বিভিন্ন বাণিজ্যিক রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেস, ডিএনএ পলিমারেজ এবং আরএনএ পলিমারেজের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল।
মানুষের RNase ইনহিবিটরদের তুলনায়, মুরিন RNase ইনহিবিটরে দুটি সিস্টাইন থাকে না যা অক্সিডেশনের প্রতি অত্যন্ত সংবেদনশীল যা ইনহিবিটারকে নিষ্ক্রিয় করে দেয়।এটি DTT এর কম ঘনত্বে (1 মিমি এর কম) স্থিতিশীল করে তোলে।এই বৈশিষ্ট্যটি এটিকে এমন প্রতিক্রিয়াগুলিতে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত করে তোলে যেখানে DTT-এর উচ্চ ঘনত্ব প্রতিক্রিয়ার প্রতিকূল (যেমন রিয়েল-টাইম RT-PCR)।
Aআবেদন
এই পণ্যটি যে কোনও পরীক্ষায় ব্যাপকভাবে ব্যবহার করা যেতে পারে যেখানে আরএনএ অবক্ষয় এড়াতে RNase হস্তক্ষেপ সম্ভব, যেমন:
1.cDNA, RT-PCR, RT-qPCR ইত্যাদির প্রথম স্ট্র্যান্ডের সংশ্লেষণ।
2.ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন/অনুবাদের সময় (যেমন, ভিট্রো ভাইরাল রেপ্লিকেশন সিস্টেমে) অবক্ষয় থেকে আরএনএকে রক্ষা করে।
3.আরএনএ পৃথকীকরণ এবং পরিশোধনের সময় RNase কার্যকলাপের বাধা।
জমা শর্ত
পণ্যটি -25～-15 ℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে, 2 বছরের জন্য বৈধ।
স্টোরেজ বাফার
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT এবং 50% গ্লিসারল।
ইউনিট সংজ্ঞা
5ng ribonuclease A-এর কার্যকলাপকে 50% দ্বারা বাধা দেওয়ার জন্য প্রয়োজনীয় মুরিন RNase ইনহিবিটরের পরিমাণকে এক ইউনিট (U) হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল।
প্রোটিনের আণবিক ওজন
মুরিন RNase ইনহিবিটরের আণবিক ওজন 50 kDa।
মান নিয়ন্ত্রণ
Exonuclease কার্যকলাপ:
16 ঘন্টার জন্য 37℃ এ 1 μg λ -Hind III ডাইজেস্ট ডিএনএ সহ 40 U এর মিউরিন RNase ইনহিবিটর অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত কোনও অবনতি দেয় না।
এন্ডোনিউক্লিজ কার্যকলাপ:
1μg λ DNA সহ 1μg λ DNA এর 40 U 37℃ এ 16 ঘন্টার জন্য অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত কোন অবনতি হয় না।
নিকিং কার্যকলাপ:
1μg pBR322 এর সাথে 1μg pBR322 এর 40U 37℃ এ 16 ঘন্টার জন্য অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত কোন অবনতি হয় না।
RNase কার্যকলাপ:
40U মুরিন RNase ইনহিবিটর 1.6μg MS2 RNA সহ 4 ঘন্টার জন্য 37℃ এ অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত কোন অবনতি হয় না।
E.কোলাই ডিএনএ:
E. coli 16S rRNA লোকাসের জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার সহ TaqMan qPCR ব্যবহার করে E. coli genomic DNA-এর উপস্থিতির জন্য 40 U মুরিন RNase ইনহিবিটর স্ক্রীন করা হয়।ই. কোলাই জিনোমিক ডিএনএ দূষণ হল ≤ 0.1 pg/40 U।
Notes
1. হিংসাত্মক দোলন বা আলোড়ন এনজাইম নিষ্ক্রিয়তার দিকে পরিচালিত করবে।
2. এর সর্বোত্তম তাপমাত্রা পরিসীমা ছিল 25-55 ℃, এবং এটি 65℃ এবং তার উপরে নিষ্ক্রিয় ছিল।
3. RNase H, RNase 1 এবং RNase T1-এর কার্যক্রম মুরিন RNase ইনহিবিটর দ্বারা বাধাপ্রাপ্ত হয়নি।
4. RNase কার্যকলাপের বাধা বিস্তৃত pH-এ পাওয়া গেছে (pH 5-9 সবই সক্রিয় ছিল), এবং সর্বোচ্চ কার্যকলাপ pH 7-8 এ পরিলক্ষিত হয়েছে।
5.যেহেতু রাইবোনিউক্লিজগুলি সাধারণত ডিনাচারিং অবস্থার অধীনে কার্যকলাপ ধরে রাখে, তাই RNase ইনহিবিটর অণুগুলিকে বিকৃত করা এড়াতে যত্ন নেওয়া উচিত যা রাইবোনিউক্লিজের সাথে জটিল হয়েছে।সক্রিয় রাইবোনিউক্লিজের নিঃসরণ রোধ করতে, 50 ডিগ্রি সেলসিয়াসের বেশি তাপমাত্রা এবং ইউরিয়া বা অন্যান্য ডিনাচারিং এজেন্টের উচ্চ ঘনত্ব এড়ানো উচিত।
