Rnase ইনহিবিটার (গ্লিসারল মুক্ত)
Murine RNase ইনহিবিটর হল একটি রিকম্বিন্যান্ট মুরিন RNase ইনহিবিটর যা E.coli থেকে প্রকাশিত এবং শুদ্ধ করা হয়।এটি অ-সমযোজী বন্ধনের মাধ্যমে 1:1 অনুপাতে RNase A, B বা C এর সাথে আবদ্ধ হয়, যার ফলে তিনটি এনজাইমের ক্রিয়াকলাপকে বাধা দেয় এবং RNA কে অবক্ষয় থেকে রক্ষা করে।যাইহোক, এটি Aspergillus থেকে RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H বা RNase এর বিরুদ্ধে কার্যকর নয়।Murine RNase ইনহিবিটার RT-PCR, RT-qPCR এবং IVT mRNA দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং বিভিন্ন বাণিজ্যিক রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেস, ডিএনএ পলিমারেজ এবং আরএনএ পলিমারেজের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল।
মানুষের RNase ইনহিবিটরদের তুলনায়, মুরিন RNase ইনহিবিটরে দুটি সিস্টাইন থাকে না যা অক্সিডেশনের প্রতি অত্যন্ত সংবেদনশীল যা ইনহিবিটারকে নিষ্ক্রিয় করে দেয়।এটি DTT এর কম ঘনত্বে (1 মিমি এর কম) স্থিতিশীল করে তোলে।এই বৈশিষ্ট্যটি এটিকে এমন প্রতিক্রিয়াগুলিতে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত করে তোলে যেখানে DTT-এর উচ্চ ঘনত্ব প্রতিক্রিয়ার প্রতিকূল (যেমন রিয়েল-টাইম RT-PCR)।
Aআবেদন
এই পণ্যটি যে কোনও পরীক্ষায় ব্যাপকভাবে ব্যবহার করা যেতে পারে যেখানে আরএনএ অবক্ষয় এড়াতে RNase হস্তক্ষেপ সম্ভব, যেমন:
1. ফার্স্ট-স্ট্র্যান্ড cDNA সংশ্লেষণ, RT-PCR, RT-qPCR, ইত্যাদি;
2. ইন-ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন/অনুবাদে (যেমন ভাইরাল রেপ্লিকেশন ইন ভিট্রো);
3. আরএনএ বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধনের সময় RNase কার্যকলাপের বাধা।
জমা শর্ত
-25～-15℃ এ স্টোর করুন;
হিমায়িত-গলানো চক্র ≤ 5 বার;
1 বছরের জন্য বৈধ।
ইউনিট সংজ্ঞা
RNase A-এর 5 ng ক্রিয়াকলাপকে 50% দ্বারা বাধা দেওয়ার জন্য প্রয়োজনীয় RNase ইনহিবিটরের পরিমাণ হিসাবে এক ইউনিটকে সংজ্ঞায়িত করা হয়।
আণবিক ভর
RNase ইনহিবিটর (গ্লিসারল-মুক্ত) একটি 50 kDa প্রোটিন।
মান নিয়ন্ত্রণ
Exonuclease কার্যকলাপ:
1 μg λ-Hind III ডাইজেস্ট ডিএনএ সহ 40 U এনজাইম 37°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশনের ফলে জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত ডিএনএ-র কোন শনাক্তযোগ্য অবক্ষয় ঘটেনি।
এন্ডোনিউক্লিজ কার্যকলাপ:
37°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টা ধরে 1 μg λ DNA সহ 40 U এনজাইমের ইনকিউবেশনের ফলে জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত ডিএনএ-র কোন শনাক্তযোগ্য অবক্ষয় ঘটেনি।
নিকিং কার্যকলাপ:
1 μg pBR322 এর সাথে 40 U এনজাইম 37℃ এ 16 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশনের ফলে জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত ডিএনএ-র কোন শনাক্তযোগ্য অবক্ষয় ঘটেনি।
RNase কার্যকলাপ:
1.6 μg MS2 RNA সহ 40 U এনজাইম 37℃-এ 4 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশনের ফলে জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত RNA-এর কোন শনাক্তযোগ্য অবক্ষয় ঘটেনি।
E.কোলাই ডিএনএ:
TaqMan qPCR দ্বারা 40 U এনজাইম সনাক্ত করা হয়।E.coli DNA হল ≤ 0. 1pg/40U।
Notes
1. এনজাইম নিষ্ক্রিয়তা রোধ করতে হিংস্রভাবে নাড়াবেন না বা নাড়াবেন না।
2.RNase ইনহিবিটর 25℃ থেকে 55℃ পর্যন্ত তাপমাত্রায় সক্রিয় থাকে এবং ≥65℃-এ নিষ্ক্রিয় হয়।
3. RNase H, RNase 1, এবং RNase T1 এর কার্যকলাপকে বাধা দেওয়া হয় না।
4. RNase কার্যকলাপকে বাধা দেওয়ার জন্য pH পরিসর প্রশস্ত (pH 5-9 এ সক্রিয়), pH 7-8 এ সর্বাধিক কার্যকলাপ প্রদর্শন করে।
