ডিএনএ এক্সট্রাকশন মিনি কিট
এই কিটটি অপ্টিমাইজড বাফার সিস্টেম এবং সিলিকা জেল কলাম বিশুদ্ধকরণ প্রযুক্তি গ্রহণ করে, যা TAE বা TBE অ্যাগারোজ জেলের বিভিন্ন ঘনত্ব থেকে 70 bp – 20 kb DNA খণ্ড পুনরুদ্ধার করতে পারে।ডিএনএ শোষণ কলাম বিশেষভাবে উচ্চ-লবণ অবস্থায় ডিএনএ শোষণ করতে পারে।এছাড়াও, কিটটি পিসিআর পণ্য, এনজাইমেটিক প্রতিক্রিয়া সিস্টেম বা অন্যান্য পদ্ধতি দ্বারা প্রাপ্ত অপরিশোধিত ডিএনএ পণ্যগুলি থেকে সরাসরি ডিএনএ খণ্ডগুলিকে বিশুদ্ধ করতে পারে এবং প্রোটিন, অন্যান্য জৈব যৌগ, অজৈব লবণ আয়ন এবং অলিগোনিউক্লিওটাইড প্রাইমারের মতো অমেধ্য অপসারণ করতে পারে।এটি নিশ্চিত করতে পারে যে পরিশোধনটি 10-15 মিনিটের মধ্যে সম্পন্ন করা যেতে পারে।পরিশোধিত ডিএনএ সরাসরি বন্ধন, রূপান্তর, এনজাইম হজম, ইন ভিট্রো ট্রান্সক্রিপশন, পিসিআর, সিকোয়েন্সিং, মাইক্রোইনজেকশন ইত্যাদির জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।
জমা শর্ত
-15 ~ -25 ℃ এ সঞ্চয় করুন এবং ঘরের তাপমাত্রায় পরিবহন করুন।
উপাদান
| উপাদান | (100 rxns) |
| বাফার জিডিপি | 80 মিলি |
| বাফার GW | 2 × 20 মিলি |
| ইলুশন বাফার | 20 মিলি |
| ফাস্ট পিউর ডিএনএ মিনি কলাম-জি | 100 |
বাফার জিডিপি:ডিএনএ বাঁধাই বাফার।
বাফার GW:ওয়াশিং বাফার;ব্যবহারের আগে বোতলে নির্দেশিত ভলিউম দ্বারা পরম ইথানল যোগ করুন।
ইলিউশন বাফার:ইলুশন।
ফাস্ট পিউর ডিএনএ মিনি কলাম-জি:ডিএনএ শোষণ কলাম।
সংগ্রহ টিউব 2 মিলি:পরিশোধন জন্য সংগ্রহ টিউব.
প্রস্তুত উপকরণ
1.5 মিলি জীবাণুমুক্ত টিউব, পরম ইথানল এবং আইসোপ্রোপ্যানল (যখন DNA খণ্ড ≤100 bp, 1 ভলিউম যোগ করুন
1 ভলিউম জেল থেকে isopropanol), জল স্নান.
পরীক্ষা প্রক্রিয়া
ব্যবহারের আগে ট্যাগে নির্দেশিত বাফার GW পাতলা করতে 80 মিলি ইথানল যোগ করুন, ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন।
পদ্ধতি
1. পিসিআর প্রতিক্রিয়া সমাধান
জেল নিষ্কাশন স্কিম: সমান ভলিউম বাফার জিডিপি পিসিআর প্রতিক্রিয়া সমাধান পুনরুদ্ধার স্কিম যোগ করুন:ভলিউম বাফারের 5 গুণ যোগ করুন
2. জিডিপি জেলের আয়তন গণনা করুন (100 μl সমান 100 মিলিগ্রাম)
জেল দ্রবীভূত করুন
3. 50 ~ 55 এ প্রিহিট করুন℃
4. বাঁধন ধোয়া
বাফার জিডিপির 300 μL যোগ করুন*
700 μL বাফার GW যোগ করুন
700 μL বাফার GW যোগ করুন
5. এলুট
20 – 30μL ইলিউশন বাফার বা ডিওনাইজড জল যোগ করুন
নোট* এই পদক্ষেপ ছাড়াই পিসিআর প্রতিক্রিয়া তরল পুনরুদ্ধার
জেল নিষ্কাশন প্রোগ্রাম
1. ডিএনএ খণ্ডের ভগ্নাংশের জন্য ডিএনএ ইলেক্ট্রোফোরসিসের পরে, ইউভি আলোর অধীনে অ্যাগারোজ জেল থেকে ডিএনএ খণ্ডের একক স্ট্রাইপ এক্সাইজ করুন।জেলের আপাত আর্দ্রতা শোষণ করতে শোষক কাগজ ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয় এবং যতটা সম্ভব অতিরিক্ত অ্যাগারোজ অপসারণ করে জেল স্লাইসের আকার ছোট করুন।জেল স্লাইস (মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউব ছাড়া) এর আয়তন গণনা করুন: 100 মিলিগ্রাম জেলস্লাইসের আয়তন প্রায় 100 μL, অনুমান করে ঘনত্ব 1g/ml।
2. সমান ভলিউম বাফার জিডিপি যোগ করুন, 7-10 মিনিটের জন্য 50~55℃ এ ইনকিউবেট করুন (জেলের আকার অনুযায়ী, জেলটি সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত না হওয়া পর্যন্ত ইনকিউবেশন সময় সামঞ্জস্য করুন)।ইনকিউবেশনের সময় টিউবটি 2 বার উল্টান।
Δ বাফার জিডিপির 1-3 ভলিউমের সংযোজন DNA পুনরুদ্ধারের দক্ষতাকে প্রভাবিত করবে না।যদি ডিএনএ খণ্ডটি <100 bp পুনরুদ্ধার করতে হয়, বাফার জিডিপির 3 ভলিউম যোগ করতে হবে;জেলের টুকরোটি সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত হয়ে গেলে, 1 ভলিউম আইসোপ্রোপ্যানল যোগ করুন এবং পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন, তারপরে পরবর্তী ধাপে যান।
3. নমুনাটিকে টিউবের নীচে আনার জন্য সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ করুন, সংগ্রহ টিউবে 2 মিলি ফাস্টপিউর ডিএনএ মিনি কলাম-জি ঢোকান, সাবধানে সর্বাধিক 700 μL দ্রবণ স্থানান্তর করুন
পরিস্রাবণ কলামের সময়, 30-60 সেকেন্ডের জন্য 12,000 rpm (13,800 X g) এ সেন্ট্রিফিউজ।
4. পরিস্রুত বাদ দিন এবং কলামে 300 μL বাফার জিডিপি যোগ করুন, ঘরের তাপমাত্রায় 1 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন, 30-60 সেকেন্ডের জন্য 12,000 rpm (13,800 X g) সেন্ট্রিফিউজ করুন।
5. ফিল্ট্রেট বাতিল করুন এবং কলামে 700 μL বাফার GW যোগ করুন (পরম ইথানল আগে থেকে যোগ করা হয়েছে কিনা তা পরীক্ষা করুন!) 30-60 সেকেন্ডের জন্য 12,000 rpm (13,800 X g) সেন্ট্রিফিউজ করুন।
Δ অনুগ্রহ করে শোষণ কলামের দেয়ালের চারপাশে বাফার GW যোগ করুন, অথবা বাফার GW ব্যাক কভার যোগ করুন এবং টিউব প্রাচীরের সাথে লেগে থাকা লবণকে সম্পূর্ণরূপে ফ্লাশ করতে সাহায্য করার জন্য এটি 2 - 3 বার উল্টো করে মেশান।
6. ধাপ 5 পুনরাবৃত্তি করুন।
Δ দুইবার বাফার GW দিয়ে ফ্লাশ করা নিশ্চিত করতে পারে যে লবণ সম্পূর্ণরূপে অপসারণ করা হয়েছে এবং পরবর্তী পরীক্ষা-নিরীক্ষার প্রভাব দূর করতে পারে।
7. পরিস্রুত বাদ দিন এবং 2 মিনিটের জন্য 12,000 rpm (13,800 X g) এ খালি কলামটি সেন্ট্রিফিউজ করুন।
8. একটি পরিষ্কার 1.5 মিলি মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউবে কলামটি ঢোকান, কলামের ঝিল্লির কেন্দ্রে 20 - 30 μL ইলিউশন বাফার যোগ করুন, 2 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন এবং তারপর 12,000 rpm (13,800 X গ্রা) এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।কলামটি বাতিল করুন, প্রাপ্ত ডিএনএ -20 এ সংরক্ষণ করুন।
Δ ধাপ 8 এর সুপারনাট্যান্টকে আবার ইলুট করার জন্য কলামে স্থানান্তর করা এবং ইলিউশন বাফারকে 55 এ প্রিহিটিং করা (যখন DNA খণ্ড >3 kb) পুনরুদ্ধারের দক্ষতা বাড়াতে সহায়ক হতে পারে।
পিসিআর পণ্য পুনরুদ্ধার প্রোগ্রাম
এই প্রোটোকলটি পিসিআর পণ্য, এনজাইমেটিক প্রতিক্রিয়া সিস্টেম এবং অন্যান্য ডিএনএ অশোধিত পণ্য (জেনেটিক ডিএনএ সহ) থেকে ডিএনএ টুকরো শুদ্ধ করার জন্য প্রযোজ্য।এই সমাধান দক্ষতার সাথে বিভিন্ন নিউক্লিওটাইড, প্রাইমার, প্রাইমার ডাইমার, লবণের অণু, এনজাইম এবং অন্যান্য অমেধ্য অপসারণ করতে পারে।
1. সংক্ষেপে সেন্ট্রিফিউজ পিসিআর পণ্য, এনজাইমেটিক প্রতিক্রিয়া সমাধান, এবং অন্যান্য ডিএনএ অশোধিত পণ্য।পাইপেট দিয়ে তাদের আয়তন অনুমান করুন এবং একটি নির্বীজিত 1.5 মিলি বা 2 মিলি টিউবে স্থানান্তর করুন।100 μL পর্যন্ত ভলিউম পর্যন্ত ddH2O যোগ করুন;উচ্চ ঘনত্ব সহ জিনোমিক ডিএনএর জন্য, ddH2O দিয়ে 300 μL এ পাতলা করা পুনরুদ্ধারের দক্ষতা উন্নত করতে সাহায্য করবে।
2. বাফার জিডিপির 5 ভলিউম যোগ করুন, ইনভার্টিং বা ঘূর্ণি দ্বারা পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন।যদি সুদের ডিএনএ খণ্ড > 100 bp, ইথানলের অতিরিক্ত 1.5 ভলিউম (নমুনা + বাফার জিডিপি) যোগ করতে হবে।
3. কলামটি সংগ্রহের টিউবের মধ্যে ঢোকান, মিশ্রণটিকে কলামে স্থানান্তর করুন, 30 - 60 সেকেন্ডের জন্য 12,000 rpm (13,800 ×g) এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।মিশ্র দ্রবণের আয়তন যদি >700 µL হয়, তাহলে শোষণ কলামটিকে সংগ্রহের টিউবে ফিরিয়ে দিন, অবশিষ্ট দ্রবণটি শোষণ কলামে স্থানান্তর করুন এবং 30 – 60 সেকেন্ডের জন্য 12,000 rpm (13,800 × g) এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।
4. পরবর্তী কর্মক্ষমতা 08- 1/জেল নিষ্কাশন প্রোগ্রামের 5 - 8 ধাপকে নির্দেশ করে।
অ্যাপ্লিকেশন
TAE বা TBE agarose জেলের বিভিন্ন ঘনত্ব;পিসিআর পণ্য, এনজাইমেটিক প্রতিক্রিয়া সিস্টেম বা বিভিন্ন পদ্ধতি দ্বারা প্রাপ্ত অন্যান্য অপরিশোধিত ডিএনএ পণ্য।উদ্ধারকৃত টুকরো থেকে পরিসীমা70 bp -20 kb.
মন্তব্য
শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য।ডায়াগনস্টিক পদ্ধতিতে ব্যবহারের জন্য নয়।
1. ব্যবহার করার আগে ট্যাগে নির্দেশিত বাফার GW পাতলা করতে 80 মিলি ইথানল যোগ করুন, ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করুন।
2. কম-তাপমাত্রার সঞ্চয়স্থানের সময় বাফার জিডিপি যদি সহজ হয় তবে এটি ব্যবহারের আগে কিছু সময়ের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় রাখা যেতে পারে।প্রয়োজনে, এটি একটি 37℃ জলের স্নানে প্রিহিট করা যেতে পারে যতক্ষণ না অবক্ষেপ সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত হয়, এবং তারপর এটি মেশানোর পরে ব্যবহার করা যেতে পারে।
3. জল স্নানের তাপমাত্রা 50 ~ 55 ℃ আগে সেট করুন।
4. 08-1/জেল এক্সট্র্যাকশন প্রোগ্রামের ধাপ 1-এ, জেল স্লাইসের আকার ছোট করে তা দ্রবীভূত হওয়ার সময়কে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করবে এবং পুনরুদ্ধারের দক্ষতা বৃদ্ধি করবে (লিনিয়ারাইজড ডিএনএ উচ্চ তাপমাত্রায় ক্রমাগত উন্মুক্ত হলে সহজেই হাইড্রোলাইজ করা যায়)।দীর্ঘ সময়ের জন্য ডিএনএ জেলকে ইউভিতে প্রকাশ করবেন না, কারণ অতিবেগুনী আলো ডিএনএ ক্ষতির কারণ হতে পারে।
5. জেলটি 08- 1/জেল নিষ্কাশন প্রোগ্রাম ধাপ 2-এ সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত করুন, অন্যথায় DNA পুনরুদ্ধারের দক্ষতা গুরুতরভাবে প্রভাবিত হবে।
6. প্রিহিট ইলিউশন বাফার বা ddH2O থেকে 55℃, যা ডিএনএ ইলিউশন দক্ষতা উন্নত করতে সহায়ক।এটি 2.5 মিমি ট্রিস-এইচসিএল, পিএইচ 7.0 – 8.5 ইলুয়েন্টে ডিএনএ সংরক্ষণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
