DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
বিড়াল নম্বর: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) হল একটি endodeoxyribonuclease যা একক- বা ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড DNA হজম করতে পারে।এটি 5'-টার্মিনালে ফসফেট গ্রুপ এবং 3'-টার্মিনালে হাইড্রক্সিল সহ মনোডিঅক্সিনিউক্লিওটাইডস বা একক- বা ডবল-স্ট্র্যান্ডেড অলিগোডিঅক্সিনিউক্লিওটাইড তৈরি করতে ফসফোডিস্টার বন্ডগুলিকে চিনতে এবং ক্লিভ করে।DNase I এর কার্যকলাপ Ca এর উপর নির্ভর করে2+এবং Mn এর মত দ্বি-বিভক্ত ধাতব আয়ন দ্বারা সক্রিয় করা যেতে পারে2+এবং Zn2+.5 মিমি Ca2+হাইড্রোলাইসিস থেকে এনজাইম রক্ষা করে।এমজি এর উপস্থিতিতে2+, এনজাইমটি এলোমেলোভাবে ডিএনএর যেকোন স্ট্র্যান্ডের যেকোন সাইটকে চিনতে এবং ছিঁড়তে পারে।Mn উপস্থিতিতে2+, ডিএনএ-র ডাবল স্ট্র্যান্ডগুলিকে একইসাথে প্রায় একই জায়গায় চিনতে পারে এবং ক্লিভ করে ফ্ল্যাট শেষের ডিএনএ টুকরা বা 1-2টি নিউক্লিওটাইড ছড়িয়ে থাকা আঠালো শেষ ডিএনএ টুকরা তৈরি করতে পারে।
উপাদান
| নাম | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-মুক্ত | 20μL | 200μL | 1 মিলি | 10 মিলি |
| 10×DNase I বাফার | 1 মিলি | 1 মিলি | 5 × 1 মিলি | 5 × 10 মিলি |
জমা শর্ত
স্টোরেজের জন্য -25℃~-15℃;বরফ প্যাক অধীনে পরিবহন.
নির্দেশনা
1. নীচে তালিকাভুক্ত অনুপাত অনুযায়ী RNase-মুক্ত টিউবে প্রতিক্রিয়া সমাধান প্রস্তুত করুন:
| উপাদান | আয়তন |
| আরএনএ | X µg |
| 10 × DNase I বাফার | 1μL |
| DNase I, RNase-মুক্ত (5U/μL) | 1 U প্রতি µg RNA① |
| ডিডিএইচ2O | 10μL পর্যন্ত |
দ্রষ্টব্য: ① DNase I এর ভলিউম গণনা করুন যা RNA এর পরিমাণের উপর ভিত্তি করে যোগ করতে হবে।
2. 15 মিনিটের জন্য 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM এর চূড়ান্ত ঘনত্বে 0.5M EDTA যোগ করুন এবং প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে 10 মিনিটের জন্য 65℃ এ তাপ দিন।নমুনাটি সরাসরি পরবর্তী প্রতিক্রিয়া যেমন বিপরীত প্রতিলিপির জন্য ব্যবহার করা যেতে পারেপরীক্ষা
ইউনিট সংজ্ঞা
এক ইউনিটকে এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয় যা pBR322 এর 1µg সম্পূর্ণরূপে হ্রাস করবে37℃ এ 10 মিনিটের মধ্যে DNA।
মান নিয়ন্ত্রণ
RNase:1.6µg MS2 RNA সহ DNase I এর 5U 37℃ তাপমাত্রায় 4 ঘন্টার জন্য কোন অবনতি দেয় নাঅ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরসিস দ্বারা নির্ধারিত।
মন্তব্য
1. অনুগ্রহ করে নিজের দ্বারা 0.5MEDTA প্রস্তুত করুন।
2. RNA এর µg প্রতি 1U DNase I ব্যবহার করুন।তবে, যদি RNA 1µg-এর কম হয়, অনুগ্রহ করে 1U DNase I ব্যবহার করুন।
3. অপারেশন চলাকালীন বরফের উপর এনজাইম রাখুন.
