2×Sensi Direct Premix-UNG (প্রোব qPCR)
বিড়াল নম্বর: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ডিএনএ নিষ্কাশন বা নমুনা প্রস্তুতি ছাড়াই নমুনা থেকে সরাসরি পিসিআর সম্পাদন করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।এই বিকারকটি হট-স্টার্ট ডিএনএ পলিমারেজ, ইউরাসিল ডিএনএ গ্লাইকোসিলেজ (ইউএনজি), আরএনএজ ইনহিবিটর, এমজিসিএল নিয়ে গঠিত।2, dNTPs (dTTP এর পরিবর্তে dUTP সহ), এবং স্টেবিলাইজার, পরিমাণগত PCR (qPCR) এর জন্য।এই বিকারকটি উচ্চ প্রতিরোধক-সহনশীলতা তৈরি করে, এবং এইভাবে এটি সরাসরি ডিএনএ নিষ্কাশন ছাড়াই গলার সোয়াব, লালা, অ্যান্টি-জমাট গোটা রক্ত, প্লাজমা এবং সিরামের মতো নমুনা সনাক্তকরণে প্রয়োগ করা যেতে পারে।বিকারকটি কিউপিসিআর-এর জন্য অ্যান্টি-ইনহিবিটরি ডিএনএ পলিমারেজ এবং ইউএনজি এনজাইমের মিশ্র এনজাইমের সাথে মালিকানাধীন বাফার ব্যবহার করে।অতএব, এটি ইনহিবিটরযুক্ত নমুনাগুলিতে লক্ষ্য জিনের একটি ভাল পরিবর্ধন পেতে পারে এবং পিসিআর অবশিষ্টাংশ এবং অ্যারোসল দূষণের কারণে সৃষ্ট মিথ্যা ইতিবাচক পরিবর্ধনকে বাধা দেয়।এই বিকারকটি বেশিরভাগ ফ্লুরোসেন্ট পরিমাণগত পিসিআর যন্ত্রের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, যেমন ফলিত বায়োসিস্টেম, এপেনডর্ফ, বায়ো-র্যাড, রোচে ইত্যাদি।
উপাদান
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG মিক্স
2. 2×SensiDirect প্রিমিক্স বাফার (dUTP)
জমা শর্ত
সমস্ত উপাদান দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -20℃ এবং 3 মাস পর্যন্ত 4℃-এ রাখা উচিত।ব্যবহার করার আগে গলানোর পরে এবং সেন্ট্রিফিউজের পরে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন।ঘন ঘন জমাট-গলানো এড়িয়ে চলুন।
সাইক্লিং প্রোটোকল
| ধাপ | তাপমাত্রা | সময় | সাইকেল |
| হজম | 50℃ | ২ মিনিট | 1 |
| পলিমারেজ অ্যাক্টিভেশন | 95℃ | 1-5 মিনিট | 1 |
| ডিনেচার | 95℃ | 10-20 সেকেন্ড | 40-50 |
| অ্যানিলিং/এক্সটেনশন | 56-64℃ | 20-60 এর দশক |
পাইপেটিং নির্দেশাবলী
| বিকারক | প্রতি ভলিউম প্রতিক্রিয়া | প্রতিক্রিয়া প্রতি ভলিউম | চূড়ান্ত ঘনত্ব |
| 2×SensiDirect Premix বাফার (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50 × সেন্সিডাইরেক্ট এনজাইম/ইউএনজি মিক্স | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×প্রাইমার-প্রোব মিক্স1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| নমুনা3, 4 | - | - | - |
| ডিডিএইচ2O | - | - | - |
| মোট আয়তন | 25 μL | 50 μL | - |
1. প্রাইমারের চূড়ান্ত ঘনত্ব সাধারণত 0.2μM হয়।আরও ভাল ফলাফলের জন্য, প্রাইমারের ঘনত্ব 0.2-1μM এর মধ্যে অপ্টিমাইজ করা যেতে পারে।
2. সাধারণত, প্রোবের ঘনত্ব 0.1-0.3μM সীমার মধ্যে অপ্টিমাইজ করা যেতে পারে।প্রোবের সর্বোত্তম ঘনত্ব রিয়েল টাইম পিসিআর অ্যামপ্লিফিকেশন ইন্সট্রুমেন্ট, প্রোবের ধরন এবং ফ্লুরোসেন্ট লেবেলিং পদার্থের প্রকারের সাথে সম্পর্কিত।অনুগ্রহ করে ইন্সট্রুমেন্ট ম্যানুয়াল বা প্রতিটি ফ্লুরোসেন্ট প্রোবের নির্দিষ্ট প্রয়োজনীয়তা পড়ুন।
3. বিভিন্ন ধরনের নমুনায় বিভিন্ন প্রকার এবং ইনহিবিটরের বিষয়বস্তু থাকে এবং টার্গেট জিনের কপি নম্বর থাকে।নমুনা ভলিউম প্রকৃত অবস্থা দ্বারা বিবেচনা করা উচিত.প্রয়োজনে নিউক্লিয়াস-মুক্ত জল বা TE বাফার যোগ করে নমুনাটি পাতলা করুন।
4. বিভিন্ন নমুনার প্রস্তাবিত ভলিউম:
| নমুনা | এক 50 এর জন্য ভলিউম μL প্রতিক্রিয়া | সর্বোচ্চ অনুপাত |
| অ্যান্টিকোয়াগুলেটেড পুরো রক্ত | 2.5 μL | 5% |
| প্লাজমা | 15 μL | 30% |
| সিরাম | 10 μL | 20% |
| গলা swab | 10 μL | 20% |
| মুখের লালা | 10 μL | 20% |
মান নিয়ন্ত্রণ
1. ফাংশন সনাক্তকরণ: qPCR এর সংবেদনশীলতা, নির্দিষ্টতা এবং পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা।
2. কোন এক্সোজেনাস নিউক্লিজ কার্যকলাপ নেই: এক্সোজেনাস এন্ডোনিউক্লিজ এবং এক্সোনিউক্লিজ দূষণ নেই।
পণ্যের নোট
1. এই পণ্যটি একটি অভিনব ধরনের হট-স্টার্ট ডিএনএ পলিমারেজ নিয়োগ করে, যা 1-5 মিনিটের মধ্যে সক্রিয় করা যেতে পারে। যেহেতু এর প্রতিক্রিয়া বাফারটি অপ্টিমাইজ করা হয়েছে, এটি প্রোব পদ্ধতি ব্যবহার করে ডবল বা একাধিক ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত PCR-এর জন্য আরও উপযুক্ত।
2. যদি PCR পরিবর্ধনের Rn মান খুব কম হয় বা পরিবর্ধনটি স্পষ্টতই বাধাগ্রস্ত হয়, নমুনার পরিমাণ হ্রাস, প্রতিক্রিয়ার পরিমাণ বৃদ্ধি বা নমুনার পূর্ববর্তী তরলীকরণ ফলাফলের উন্নতি করতে পারে।
3. রক্ত, লালা, প্রস্রাব, গলার সোয়াব ইত্যাদি সংগ্রহের ক্ষেত্রে ক্লিনিকাল মানদণ্ডের প্রয়োজনীয়তাগুলি অনুসরণ করা উচিত এবং নিউক্লিক অ্যাসিডের অবক্ষয় রোধ করতে তাজা নমুনা ব্যবহার করা যেতে পারে।
4. যেহেতু বিভিন্ন অ্যামপ্লিকনগুলির dUTP-এর জন্য আলাদা ব্যবহার দক্ষতা এবং UNG-এর সংবেদনশীলতা রয়েছে, তাই UNG সিস্টেম ব্যবহার করার সময় সনাক্তকরণ সংবেদনশীলতা কমে গেলে রিএজেন্টগুলিকে অপ্টিমাইজ করা উচিত।প্রয়োজন হলে প্রযুক্তিগত সহায়তার জন্য আমাদের সাথে যোগাযোগ করুন.
5. এক-পদক্ষেপের প্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যে বহনযোগ্য পিসিআর পণ্যগুলির পরিবর্ধন এড়াতে, পরিবর্ধনের জন্য উত্সর্গীকৃত পরীক্ষামূলক এলাকা এবং পাইপেট প্রয়োজন।গ্লাভস দিয়ে কাজ করুন এবং ঘন ঘন পরিবর্তন করুন এবং PCR পরিবর্ধনের পরে প্রতিক্রিয়া টিউব খুলবেন না।
