ওয়ার্ম স্টার্ট Bst 2.0 DNA পলিমারেজ (গ্লিসারল মুক্ত)
Bst DNA পলিমারেজ V2 ব্যাসিলাস স্টিরোথার্মোফিলাস ডিএনএ পলিমারেজ I থেকে উদ্ভূত হয়েছে, যার 5′→3′ DNA পলিমারেজ কার্যকলাপ এবং শক্তিশালী চেইন প্রতিস্থাপন কার্যকলাপ রয়েছে, কিন্তু কোন 5′→3′ exonuclease কার্যকলাপ নেই।Bst DNA পলিমারেজ V2 আদর্শভাবে স্ট্র্যান্ড-ডিসপ্লেসমেন্ট, আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন এলএএমপি (লুপ মেডিটেটেড আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন) এবং দ্রুত সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য উপযুক্ত।Bst DNA পলিমারেজ V2 হল Bst DNA পলিমারেজ V2 (HC5005A) এর উপর ভিত্তি করে একটি হট-স্টার্ট সংস্করণ যা বিপরীতমুখী পরিবর্তন প্রযুক্তি দ্বারা প্রাপ্ত, যা ঘরের তাপমাত্রায় ডিএনএ পলিমারেজ কার্যকলাপকে বাধা দিতে পারে, তাই প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি ঘরের তাপমাত্রায় পরিচালনা এবং প্রণয়ন করা যেতে পারে যাতে প্রতিরোধ করা যায় না। - নির্দিষ্ট পরিবর্ধন এবং প্রতিক্রিয়া দক্ষতা উন্নত, এবং এই সংস্করণ lyophilized করা যেতে পারে.উপরন্তু, এর কার্যকলাপ উচ্চ তাপমাত্রায় মুক্তি পায়, তাই একটি পৃথক সক্রিয়করণ পদক্ষেপের প্রয়োজন নেই।
উপাদান
| উপাদান | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA পলিমারেজ V2 (গ্লিসারল-মুক্ত)(8U/μL) | 0.2 মিলি | 1 মি.লি | 10 মিলি |
| 10×HC Bst V2 বাফার | 1.5 মি.লি | 2×1.5 মিলি | 3×10 মিলি |
| MgSO4(100 মিমি) | 1.5 মি.লি | 2×1.5 মিলি | 2×10 মিলি |
অ্যাপ্লিকেশন
1.LAMP আইসোথার্মাল অ্যামপ্লিফিকেশন
2.ডিএনএ স্ট্র্যান্ড একক স্থানচ্যুতি প্রতিক্রিয়া
3.উচ্চ জিসি জিন সিকোয়েন্সিং
4.ন্যানোগ্রাম স্তরের ডিএনএ সিকোয়েন্সিং।
স্টোরেজ কন্ডিশন
0°C এর নিচে পরিবহন এবং -25°C~-15°C এ সংরক্ষণ করা হবে।
ইউনিট সংজ্ঞা
একটি ইউনিটকে এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয় যা 65 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের মধ্যে 25 nmol dNTP অ্যাসিড অদ্রবণীয় পদার্থে অন্তর্ভুক্ত করে।
মান নিয়ন্ত্রণ
1.প্রোটিন বিশুদ্ধতা পরীক্ষা (SDS-PAGE):Bst DNA পলিমারেজ V2 এর বিশুদ্ধতা ≥99% Coomassie Blue সনাক্তকরণ ব্যবহার করে SDS-PAGE বিশ্লেষণ দ্বারা নির্ধারিত হয়।
2.Endonucleaseকার্যকলাপ:37 ℃ তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য 1 μg λDNA সহ Bst DNA পলিমারেজ V2 এর সর্বনিম্ন 8 U ধারণ করে একটি 50 μL প্রতিক্রিয়ার ইনকিউবেশনের ফলে নির্ধারিত হিসাবে কোনও সনাক্তযোগ্য অবক্ষয় হয় না।
3.Exonuclease কার্যকলাপ:1 μg λ -Hind Ⅲ ডাইজেস্ট ডিএনএ 37 ℃ তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য ন্যূনতম 8 U Bst DNA পলিমারেজ V2 সমন্বিত 50 μL প্রতিক্রিয়ার ইনকিউবেশনের ফলে নির্ধারিত হিসাবে কোনও সনাক্তযোগ্য অবক্ষয় হয় না।
4.Nickase কার্যকলাপ:1 μg pBR322 DNA সহ 37°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য Bst DNA পলিমারেজ V2-এর ন্যূনতম 8 U সমন্বিত 50 μL প্রতিক্রিয়ার ইনকিউবেশনের ফলে নির্ধারিত হিসাবে কোনও সনাক্তযোগ্য অবক্ষয় হয় না।
5.RNase কার্যকলাপ:1.6 μg MS2 RNA সহ 1.6 μg MS2 RNA 37°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য ন্যূনতম 8 U Bst DNA পলিমারেজ V2 সমন্বিত 50 μL প্রতিক্রিয়ার ইনকিউবেশনের ফলে নির্ধারিত হিসাবে কোনও সনাক্তযোগ্য অবক্ষয় হয় না।
6.ই কোলাইডিএনএ:Bst DNA পলিমারেজ V2 এর 120 U E. coli 16S rRNA লোকাসের জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার সহ TaqMan qPCR ব্যবহার করে E. coli জিনোমিক DNA এর উপস্থিতির জন্য স্ক্রীন করা হয়েছে।ই. কোলাই জিনোমিক ডিএনএ দূষণ হল ≤1 কপি।
LAMP প্রতিক্রিয়া
| উপাদান | 25μL |
| 10×HC Bst V2 বাফার | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 মিমি) | 1.5 μL |
| dNTPs (10 মিমি প্রতিটি) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 সবুজ (25×)a | 1.0 μL |
| প্রাইমার মিশ্রণb | 6 μL |
| Bst DNA পলিমারেজ V2 (গ্লিসারল-মুক্ত) (8 U/uL) | 1 μL |
| টেমপ্লেট | × μL |
| ddH₂O | 25 μL পর্যন্ত |
মন্তব্য:
1) ক.SYTOTM 16 Green (25×): পরীক্ষামূলক প্রয়োজন অনুসারে, অন্যান্য রঞ্জকগুলি বিকল্প হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে;
2) খ.প্রাইমার মিশ্রণ: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB এবং অন্যান্য ভলিউম মিশ্রিত করে প্রাপ্ত।
প্রতিক্রিয়া এবং অবস্থা
1 × HC Bst V2 বাফার, ইনকিউবেশন তাপমাত্রা 60°C থেকে 65°C এর মধ্যে।
তাপ নিষ্ক্রিয়করণ
80°C, 20মিনিট
