তাপমাত্রা সংবেদনশীল UNG
তাপমাত্রা সংবেদনশীল UNG (TS-UNG) হল E. coli-তে রিকম্বিন্যান্ট এক্সপ্রেশন দ্বারা প্রাপ্ত।এনজাইমটি ইউরাসিল-ধারণকারী একক- এবং ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ থেকে বিনামূল্যে ইউরাসিলের মুক্তিকে অনুঘটক করে এবং আরএনএর বিরুদ্ধে নিষ্ক্রিয়।E. coli জিন উৎপত্তির প্রচলিত UNG এনজাইমের সাথে তুলনা করে, TS-UNG এনজাইমের কম তাপমাত্রায় (20℃~37℃) বেশি কার্যকলাপ রয়েছে এবং এটি তাপমাত্রা সংবেদনশীল এবং সহজেই নিষ্ক্রিয় (50℃), ডিইউটিপি-ধারণকারী পরিবর্ধনের অবক্ষয় এড়ায়। প্রচলিত UNG এনজাইম নিষ্ক্রিয় হওয়ার পরে অবশিষ্ট থাকতে পারে এমন উচ্ছিষ্ট কার্যকলাপ দ্বারা ঘরের তাপমাত্রায় পণ্য।অতএব, টিএস-ইউএনজি এনজাইম শুধুমাত্র পিসিআর দূষণ প্রতিরোধ প্রতিক্রিয়ার জন্য উপযুক্ত নয়, তবে এটি আরটি-পিসিআর পরিবর্ধন প্রোগ্রামের সাথেও ভাল মেলে এবং এটি আরটি-পিসিআর দূষণ প্রতিরোধ প্রতিক্রিয়াতে ব্যবহার করা যেতে পারে।
প্রস্তাবিত আবেদন
দূষণ প্রতিরোধ পরিবর্ধন
স্টোরেজ কন্ডিশন
দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াস, ব্যবহারের আগে ভালভাবে মিশ্রিত করা উচিত, ঘন ঘন জমাট বাঁধা এড়িয়ে চলুন।
স্টোরেজ বাফার
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, স্টেবিলাইজার, 50% গ্লিসারল।
ইউনিট সংজ্ঞা
37°C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার মধ্যে 1µg সিঙ্গল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-এর ডিইউ বেসকে ক্ষয় করার জন্য প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণ হল 1 একক কার্যকলাপ (U)।
মান নিয়ন্ত্রণ
1.SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেটিক বিশুদ্ধতা 98% এর বেশি
2.অধঃপতন কার্যকলাপ, ব্যাচ থেকে ব্যাচ নিয়ন্ত্রণ, স্থিতিশীলতা
3.কোন এক্সোজেনাস নিউক্লিজ ক্রিয়াকলাপ নেই, এক্সোজেনাস এন্ডোনিউক্লিজ বা এক্সোনিউক্লিজ দূষণ নেই।
নির্দেশনা
| উপাদান | আয়তন (μL) | চূড়ান্ত ঘনত্ব |
| 10 × PCR বাফার (dNTP বিনামূল্যে, Mg²+বিনামূল্যে) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP প্রতিস্থাপন করুন) | - | 200-600 μM |
| 25 মিমি এমজিসিএল2 | 2-8 μL | 1-4 মিমি |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 ইউ |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × প্রাইমার মিক্সক | 2 | 1× |
| টেমপ্লেট | - | 1μg/প্রতিক্রিয়া |
| ddH₂O | 50 থেকে | - |
দ্রষ্টব্য: a: qPCR/qRT-PCR-এর জন্য ব্যবহার করা হলে, প্রতিক্রিয়া সিস্টেমে ফ্লুরোসেন্ট প্রোব যোগ করা উচিত।সাধারণত, 0.2 μM এর একটি চূড়ান্ত প্রাইমার ঘনত্ব ভাল ফলাফল দিতে পারে;প্রতিক্রিয়া কর্মক্ষমতা খারাপ হলে, প্রাইমারের ঘনত্ব 0.2-1 μM পরিসরে সামঞ্জস্য করা যেতে পারে।সাধারণত, প্রোবের ঘনত্ব 0.1-0.3 μM পরিসরে অপ্টিমাইজ করা হয়।প্রাইমার এবং প্রোবের সর্বোত্তম সমন্বয় খুঁজে পেতে ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্ট পরীক্ষা করা যেতে পারে।
মন্তব্য
1.TS-UNG এনজাইমের সর্বোত্তম প্রতিক্রিয়া তাপমাত্রা তুলনামূলকভাবে কম, এবং এটি 20℃~37℃, এনজাইমের ডোজ এবং প্রতিক্রিয়া সময় 0.1~0.5 U, 5~ এর পরিসরে অপ্টিমাইজ করা যেতে পারে 10 মিনিট;এবং বিপরীত প্রতিলিপি প্রক্রিয়ায় এনজাইম নিষ্ক্রিয় হতে পারে।
2.দূষণ প্রতিরোধ করার জন্য এটি PCR এবং RT-PCR-এর জন্য উপযুক্ত।
3.ঘন ঘন হিমায়িত-গলে যাওয়া এড়িয়ে চলুন, এবং বড় তাপমাত্রার ওঠানামার সংস্পর্শে আসবেন না।
4.বিবর্ধিত করা বিভিন্ন জিনগুলির dUTP-এর বিভিন্ন ব্যবহার দক্ষতা এবং UNG এনজাইমের সংবেদনশীলতা রয়েছে, তাই, যদি UNG সিস্টেমের ব্যবহার সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা হ্রাসের দিকে পরিচালিত করে, প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি সামঞ্জস্য এবং অপ্টিমাইজ করা উচিত, যদি আপনার প্রযুক্তিগত সহায়তার প্রয়োজন হয়, অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুন আমাদের প্রতিষ্ঠান.
