রোবস্টার্ট টাক ডিএনএ পলিমারেজ
Robustart Taq DNA পলিমারেজ হল একটি হট স্টার্ট ডিএনএ পলিমারেজ।এই পণ্যটি শুধুমাত্র PCR সিস্টেমের প্রস্তুতি এবং পরিবর্ধন প্রক্রিয়ায় প্রাইমারের অ-নির্দিষ্ট অ্যানিলিং বা প্রাইমার একত্রিতকরণের কারণে সৃষ্ট অ-নির্দিষ্ট প্রতিক্রিয়াকে আরও ভালভাবে বাধা দিতে পারে না।অতএব, এটির চমৎকার নির্দিষ্টতা রয়েছে এবং কম ঘনত্বের টেমপ্লেটের পরিবর্ধনের জন্য এটি আরও কার্যকর, এবং এটি মাল্টিপ্লেক্সড পিসিআর পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়ার জন্য উপযুক্ত।তদুপরি, এই পণ্যটির খুব ভাল প্রযোজ্যতা রয়েছে এবং বিভিন্ন ধরণের পিসিআর প্রতিক্রিয়ায় স্থিতিশীল পরিবর্ধন ফলাফল পাওয়া যেতে পারে।
উপাদান
1.5 U/μL Robustart Taq DNA পলিমারেজ
2.10 × PCR বাফার II (Mg²+ বিনামূল্যে) (ঐচ্ছিক)
3.25 মিমি এমজিসিএল2(ঐচ্ছিক)
* 10 × PCR বাফার II (Mg²+ বিনামূল্যে) dNTP এবং Mg²+ ধারণ করে না, অনুগ্রহ করে dNTPs এবং MgCl যোগ করুন2প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রস্তুত করার সময়।
প্রস্তাবিত অ্যাপ্লিকেশন
1.দ্রুত পরিবর্ধন।
2.একাধিক পরিবর্ধন।
3.রক্ত, সোয়াব এবং অন্যান্য নমুনার সরাসরি পরিবর্ধন।
4.শ্বাসযন্ত্রের রোগ সনাক্তকরণ।
স্টোরেজ কন্ডিশন
দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াস, ব্যবহারের আগে ভালভাবে মিশ্রিত করা উচিত, ঘন ঘন জমাট বাঁধা এড়িয়ে চলুন।
*যদি রেফ্রিজারেশনের পরে বৃষ্টিপাত হয় তবে এটি স্বাভাবিক;এটি মেশানো এবং ব্যবহারের আগে ঘরের তাপমাত্রায় ভারসাম্য বজায় রাখার পরামর্শ দেওয়া হয়।
ইউনিট সংজ্ঞা
একটি সক্রিয় ইউনিট (U) কে এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয় যা টেমপ্লেট/প্রাইমার হিসাবে সক্রিয় স্যামন স্পার্ম ডিএনএ ব্যবহার করে 30 মিনিটের জন্য 74°C তাপমাত্রায় অ্যাসিড-অদ্রবণীয় উপাদানে 10 nmol ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিওটাইড অন্তর্ভুক্ত করে।
মান নিয়ন্ত্রণ
1.SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেটিক বিশুদ্ধতা 98% এর বেশি।
2.পরিবর্ধন সংবেদনশীলতা, ব্যাচ থেকে ব্যাচ নিয়ন্ত্রণ, স্থিতিশীলতা।
3.এক্সোজেনাস নিউক্লিজ ক্রিয়াকলাপ নেই, এক্সোজেনাস এন্ডোনিউক্লিজ বা এক্সোনিউক্লিজ দূষণ নেই
নির্দেশনা
প্রতিক্রিয়া সেটআপ
| উপাদান | আয়তন (μL) | চূড়ান্ত ঘনত্ব |
| 10 × PCR বাফার II (Mg²+ বিনামূল্যে)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM প্রতিটি dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 মিমি এমজিসিএল2 | 2-8 | 1-4 মিমি |
| Robustart Taq DNA পলিমারেজ (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × প্রাইমার মিশ্রণখ | 2 | 1× |
| টেমপ্লেট | - | 1 μg/প্রতিক্রিয়া |
| ডিডিএইচ2O | 50 থেকে | - |
মন্তব্য:
1) ক.বাফারে dNTP এবং Mg²+ নেই, অনুগ্রহ করে dNTP এবং MgCl যোগ করুন2প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রস্তুত করার সময়।
2) খ.qPCR/qRT-PCR এর জন্য ব্যবহার করা হলে, প্রতিক্রিয়া সিস্টেমে ফ্লুরোসেন্ট প্রোব যোগ করা উচিত।সাধারণত, 0.2 μM এর একটি চূড়ান্ত প্রাইমার ঘনত্ব ভাল ফলাফল দেবে;প্রতিক্রিয়া কর্মক্ষমতা খারাপ হলে, প্রাইমারের ঘনত্ব 0.2-1 μM পরিসরে সামঞ্জস্য করা যেতে পারে।প্রোবের ঘনত্ব সাধারণত 0.1-0.3 μM পরিসরে অপ্টিমাইজ করা হয়।প্রাইমার এবং প্রোবের সর্বোত্তম সমন্বয় খুঁজে পেতে ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্ট পরীক্ষা করা যেতে পারে।
থার্মাল সাইক্লিং প্রোটোকল
| নিয়মিত পিসিআরপ্রক্রিয়া | |||
| ধাপ | তাপমাত্রা | সময় | চক্র |
| প্রি-ডেনেচুরেশন | 95℃ | 1-5 মিনিট | 1 |
| বিকৃতকরণ | 95℃ | 10-20 সেকেন্ড | 40-50 |
| অ্যানিলিং / এক্সটেনশন | 56-64℃ | 20-60 সেকেন্ড | |
| দ্রুত পিসিআরপ্রক্রিয়া | |||
| ধাপ | তাপমাত্রা | সময় | চক্র |
| প্রি-ডেনেচুরেশন | 95℃ | 30 সেকেন্ড | 1 |
| বিকৃতকরণ | 95℃ | 1-5 সেকেন্ড | 40-45 |
| অ্যানিলিং / এক্সটেনশন | 56-64℃ | 5-20 সেকেন্ড | |
মন্তব্য
1.দ্রুত DNA পলিমারেজের পরিবর্ধন হার 1 kb/10 s এর কম হওয়া উচিত নয়।তাপমাত্রা বৃদ্ধি এবং পতনের হার, তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণের মোড এবং বিভিন্ন PCR যন্ত্রের তাপ সঞ্চালনের দক্ষতা ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়, তাই নির্দিষ্ট দ্রুত PCR যন্ত্রের জন্য সর্বোত্তম প্রতিক্রিয়া অবস্থাকে অপ্টিমাইজ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
2.উচ্চতর নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা সহ সিস্টেমটি অত্যন্ত অভিযোজিত।
3.উচ্চ সংবেদনশীলতা পিসিআর সনাক্তকরণ বিকারক হিসাবে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত, এবং মাল্টিপ্লেক্স পিসিআর পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়াগুলিতে ব্যবহার করা যেতে পারে।
4.5′→3′ পলিমারেজ কার্যকলাপ, 5′→3′ exonuclease কার্যকলাপ;কোন 3′→5′ exonuclease কার্যকলাপ;প্রুফরিডিং ফাংশন নেই।
5.PCR এবং RT-PCR এর গুণগত এবং পরিমাণগত পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত।
6.পিসিআর পণ্যের 3′ প্রান্তটি হল A, যা সরাসরি একটি T ভেক্টরে ক্লোন করা যেতে পারে।
7.কম অ্যানিলিং তাপমাত্রা সহ প্রাইমারের জন্য বা 200 bp-এর বেশি লম্বা টুকরোগুলির পরিবর্ধনের জন্য তিন-পদক্ষেপ পদ্ধতি সুপারিশ করা হয়।
