M-MLV রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ
রেভস্ক্রিপ্ট রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ জেনেটিক ইঞ্জিনিয়ারিং প্রযুক্তি দ্বারা প্রাপ্ত হয়।এটির উচ্চতর সিডিএনএ সংশ্লেষণ ক্ষমতা, তাপীয় স্থিতিশীলতা এবং প্রতিক্রিয়া তাপমাত্রা সীমা (60 ডিগ্রি সেলসিয়াস পর্যন্ত) রয়েছে।সংশ্লেষিত সিডিএনএ পণ্য 10 কেবি পর্যন্ত।এটি টেমপ্লেটগুলির সখ্যতা বাড়ায় এবং জটিল গৌণ কাঠামো বা কম অনুলিপি জিনের সাথে RNA টেমপ্লেটগুলির বিপরীত প্রতিলিপির জন্য উপযুক্ত।
উপাদান
| উপাদান | HC2003B (10,000U) | HC2003B (5*10,000U) | HC2003B (200,000U) |
| RevScript বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্ট (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 মি.লি |
| 5 × RevScript বাফার | 250 μL | 1.25 মিলি | 5 মি.লি |
স্টোরেজ কন্ডিশন
এই পণ্যটি 2 বছরের জন্য -25°C~-15°C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা উচিত।
ইউনিট সংজ্ঞা
একটি ইউনিট প্রাইমার হিসাবে Oligo(dT) ব্যবহার করে 37°C তাপমাত্রায় 10 মিনিটের মধ্যে অ্যাসিড-অদ্রবণীয় উপাদানে 1 nmol dTTP অন্তর্ভুক্ত করে।
প্রতিক্রিয়া সেটআপ
1.RNA টেমপ্লেটের বিকৃতকরণ (এই ধাপটি ঐচ্ছিক, RNA টেমপ্লেটের বিকৃতকরণ সেকেন্ডারি স্ট্রাকচার খুলতে সাহায্য করে, যা প্রথম স্ট্র্যান্ড cDNA-এর ফলন উন্নত করবে।)
| উপাদান | আয়তন (μL) |
| RNase বিনামূল্যে ddH2O | 13 থেকে |
| অলিগো(dT)18 (50 μmol/L) বা র্যান্ডম প্রাইমার (50 μmol/L) অথবা জিন স্পেসিফিক প্রাইমার (2 μmol/L) | 1 |
| বা 1 | |
| বা 1 | |
| আরএনএ টেমপ্লেট | X a |
মন্তব্য:
1) a: মোট RNA: 1-5 ug বা mRNA: 1-500 ng
2) 5 মিনিটের জন্য 65 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউব করা, তারপর 2 মিনিটের জন্য ঠান্ডা হওয়ার জন্য অবিলম্বে বরফের উপর স্থানান্তর করুন।প্রতিক্রিয়া তরল সংগ্রহের জন্য সংক্ষিপ্ত সেন্ট্রিফিউগেশন, নিম্নলিখিত সারণীতে দেখানো হিসাবে বিপরীত প্রতিলিপি প্রতিক্রিয়া সমাধান যোগ করুন।আলতো করে মিশ্রিত পিপেট।
1.প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের প্রস্তুতি (20 μL আয়তন)
| উপাদান | আয়তন (μL) |
| পূর্ববর্তী ধাপের মিশ্রণ | 13 |
| 5×বাফার | 4 |
| dNTP মিক্স (10nmol/L) | 1 |
| বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ (200 U/μL) | 1 |
| RNase ইনহিবিটার (40 U/μL) | 1 |
1.নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে প্রতিক্রিয়া সম্পাদন করুন:
| তাপমাত্রা (°সে) | সময় |
| 25 °সেa | 5 মিনিট |
| 42 °সেb | 15-30 মিনিট |
| 85 °সেc | 5 মিনিট |
মন্তব্য:
1) ক.5 মিনিটের জন্য 25 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউব করা শুধুমাত্র এলোমেলো হেক্সামার ব্যবহার করার জন্য প্রয়োজন।Oligo (dT) ব্যবহার করার সময় অনুগ্রহ করে এই ধাপটি এড়িয়ে যান18বা জিন স্পেসিফিক প্রাইমার।
2) খ.প্রস্তাবিত বিপরীত প্রতিলিপি তাপমাত্রা হল 42°C, জটিল গৌণ কাঠামো বা উচ্চ GC সামগ্রী সহ টেমপ্লেটগুলির জন্য, প্রতিক্রিয়া তাপমাত্রা 50-55°C এ বাড়ানোর সুপারিশ করা হয়।
3) গ.বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ নিষ্ক্রিয় করতে 5 মিনিটের জন্য 85 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গরম করুন।
4) পণ্যটি সরাসরি পিসিআর বা কিউপিসিআর প্রতিক্রিয়াতে ব্যবহার করা যেতে পারে, বা স্বল্পমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য পণ্যগুলিকে আলিগুট করে -80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।ঘন ঘন জমাট-গলানো এড়িয়ে চলুন।
5) পণ্যটি এক-পদক্ষেপ RT-qPCR-এর জন্য উপযুক্ত, প্রতিটি 25μL প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের জন্য 10-20 U বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ যোগ করার বা প্রকৃত পরিস্থিতি অনুযায়ী ধীরে ধীরে বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজের পরিমাণ বাড়ানোর সুপারিশ করা হয়।
মন্তব্য
1.পরীক্ষামূলক এলাকা পরিষ্কার রাখুন দয়া করে;অপারেশনের সময় পরিষ্কার গ্লাভস এবং মাস্ক পরতে হবে।RNase দূষণ রোধ করতে পরীক্ষায় ব্যবহৃত সমস্ত ভোগ্যপণ্য RNase মুক্ত হওয়া উচিত।
2.আরএনএ অবক্ষয় রোধ করার জন্য সমস্ত পদ্ধতি বরফের উপর সঞ্চালিত করা উচিত।
3.বিপরীত প্রতিলিপির উচ্চ দক্ষতা নিশ্চিত করতে উচ্চ মানের RNA নমুনা সুপারিশ করা হয়।
4.এই পণ্য শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য.
5.আপনার নিরাপত্তার জন্য ল্যাব কোট এবং ডিসপোজেবল গ্লাভস দিয়ে কাজ করুন।
