M-MLV নিওস্ক্রিপ্ট রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ

নিওস্ক্রিপ্ট রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ হল একটি বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ যা মোলোনি মুরিন লিউকেমিয়া ভাইরাসের উৎপত্তি এবং ইকোলিতে প্রকাশের এম-এমএলভি জিনের মিউটেশন স্ক্রিনিং দ্বারা প্রাপ্ত।এনজাইম RNase H কার্যকলাপ অপসারণ করে, উচ্চ তাপমাত্রা সহনশীলতা রয়েছে এবং উচ্চ-তাপমাত্রা বিপরীত প্রতিলিপির জন্য উপযুক্ত।অতএব, এটি সিডিএনএ সংশ্লেষণের উপর আরএনএ উচ্চ-স্তরের কাঠামো এবং অ-নির্দিষ্ট কারণগুলির প্রতিকূল প্রভাব দূর করার জন্য সহায়ক, এবং উচ্চ স্থিতিশীলতা এবং বিপরীত প্রতিলিপি সংশ্লেষণ ক্ষমতা রয়েছে।এনজাইমের উচ্চ স্থিতিশীলতা এবং বিপরীত প্রতিলিপি সংশ্লেষণ ক্ষমতা রয়েছে।

উপাদান

1.200 U/μL নিওস্ক্রিপ্ট রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ

2.5 × প্রথম-স্ট্র্যান্ড বাফার (ঐচ্ছিক)

* 5 × ফার্স্ট-স্ট্র্যান্ড বাফারে dNTP নেই, প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রস্তুত করার সময় দয়া করে dNTP যোগ করুন

প্রস্তাবিত আবেদন

1.এক-ধাপে কিউআরটি-পিসিআর।

2.আরএনএ ভাইরাস সনাক্তকরণ।

স্টোরেজ কন্ডিশন

দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াস, ব্যবহারের আগে ভালভাবে মিশ্রিত করা উচিত, ঘন ঘন জমাট বাঁধা এড়িয়ে চলুন।

ইউনিট সংজ্ঞা

একটি ইউনিট পলি(A)•oligo(dT) ব্যবহার করে 37°C তাপমাত্রায় 10 মিনিটে 1 nmol dTTP অন্তর্ভুক্ত করে₂₅টেমপ্লেট/প্রাইমার হিসাবে।

মান নিয়ন্ত্রণ

1.SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেটিক বিশুদ্ধতা 98% এর বেশি।

2.পরিবর্ধন সংবেদনশীলতা, ব্যাচ থেকে ব্যাচ নিয়ন্ত্রণ, স্থিতিশীলতা।

3.এক্সোজেনাস নিউক্লিজ ক্রিয়াকলাপ নেই, এক্সোজেনাস এন্ডোনিউক্লিজ বা এক্সোনিউক্লিজ দূষণ নেই

প্রথম চেইন প্রতিক্রিয়া সমাধানের জন্য প্রতিক্রিয়া সেটআপ

1.প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ প্রস্তুতি

মন্তব্য:a/b: আপনার পরীক্ষামূলক প্রয়োজন অনুযায়ী অনুগ্রহ করে বিভিন্ন ধরনের প্রাইমার নির্বাচন করুন।

2.5 মিনিটের জন্য 65 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গরম করুন এবং 2 মিনিটের জন্য বরফের উপর দ্রুত ঠান্ডা করুন।

3.উপরের সিস্টেমে নিম্নলিখিত উপাদানগুলিকে মোট 20µL ভলিউমে যুক্ত করুন এবং আলতো করে মেশান:

4. নিম্নলিখিত শর্ত অনুযায়ী প্রতিক্রিয়া সঞ্চালন করুন:

(1) যদি র‍্যান্ডম প্রাইমার ব্যবহার করা হয়, তাহলে প্রতিক্রিয়াটি 10 ​​মিনিটের জন্য 25℃ এবং তারপর 30~60 মিনিটের জন্য 50℃-এ করা উচিত;

(2) যদি Oligo dT বা নির্দিষ্ট প্রাইমার ব্যবহার করা হয়, তাহলে বিক্রিয়াটি 50℃-এ 30~60মিনিটের জন্য করা উচিত।

5.নিওস্ক্রিপ্ট রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ নিষ্ক্রিয় করতে এবং প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে 5 মিনিটের জন্য 95℃ এ তাপ করুন।

6.বিপরীত প্রতিলিপি পণ্যগুলি সরাসরি পিসিআর প্রতিক্রিয়া এবং ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর প্রতিক্রিয়াতে ব্যবহার করা যেতে পারে, বা দীর্ঘ সময়ের জন্য -20℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

পিসিআর আরকর্ম:

1.প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ প্রস্তুতি

মন্তব্য:একটি: খুব বেশি প্রথম চেইন প্রতিক্রিয়া সমাধান যোগ করা হলে, পিসিআর প্রতিক্রিয়া বাধা হতে পারে।

2.পিসিআর প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি

মন্তব্য

1.42℃~55℃ পরিসরে বিপরীত প্রতিলিপি তাপমাত্রা অপ্টিমাইজেশানের জন্য উপযুক্ত।

2.এটির আরও ভাল স্থিতিশীলতা রয়েছে, এটি উচ্চ তাপমাত্রার বিপরীত প্রতিলিপি পরিবর্ধনের জন্য উপযুক্ত।উপরন্তু, এটি RNA এর জটিল কাঠামোগত অঞ্চলগুলির মধ্য দিয়ে দক্ষতার সাথে পাস করার জন্য অনুকূল।এছাড়াও, এটাএক-ধাপে মাল্টিপ্লেক্স ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত RT-PCR সনাক্তকরণের জন্য উপযুক্ত।

3.বিভিন্ন PCR পরিবর্ধন এনজাইমের সাথে ভাল সামঞ্জস্য এবং উচ্চ সংবেদনশীলতা RT-PCR প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য উপযুক্ত।

4.উচ্চ সংবেদনশীলতা এক-পদক্ষেপ ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত RT-PCR প্রতিক্রিয়ার জন্য উপযুক্ত, কার্যকরভাবে টেমপ্লেটগুলির কম ঘনত্ব সনাক্তকরণের হার উন্নত করে।

5.সিডিএনএ লাইব্রেরি নির্মাণের জন্য উপযুক্ত।