prou
পণ্য
ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড RNA (dsRNA) ELISA KIT HCP0033A বৈশিষ্ট্যযুক্ত ছবি
  • ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড RNA (dsRNA) ELISA KIT HCP0033A

ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড RNA (dsRNA) ELISA KIT


বিড়াল নম্বর: HCP0033A

প্যাকেজ: 48T/96T

এই কিটটি বায়োটিন-স্ট্রেপ্টাভিডিন সিস্টেমের সাথে একটি এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) সংযোগ।

পণ্যের বর্ণনা

প্রোডাক্ট তথ্য

এই কিটটি একটি এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাসে (ELISA) বায়োটিন-স্ট্রেপ্টাভিডিন সিস্টেমের সাথে কাপলিং, 60 বেস পেয়ার (বিপি) এর উপরে দৈর্ঘ্যের ডিএসআরএনএর পরিমাণগত পরিমাপের জন্য, ক্রম নির্বিশেষে।প্লেটটি অ্যান্টি-dsRNA অ্যান্টিবডি দিয়ে প্রি-কোটেড করা হয়েছে।নমুনায় উপস্থিত dsRNA যোগ করা হয় এবং কূপের প্রলেপযুক্ত অ্যান্টিবডিগুলির সাথে আবদ্ধ হয়।এবং তারপরে বায়োটিনিলেটেড অ্যান্টি-dsRNA অ্যান্টিবডি যোগ করা হয় এবং নমুনায় dsRNA-তে আবদ্ধ হয়।ধোয়ার পরে, এইচআরপি-স্ট্রেপ্টাভিডিন যোগ করা হয় এবং বায়োটিনিলেটেড অ্যান্টি-ডিএসআরএনএ অ্যান্টিবডির সাথে আবদ্ধ হয়।ইনকিউবেশনের পর আনবাউন্ড এইচআরপি-স্ট্রেপ্টাভিডিন ধুয়ে যায়।তারপর TMB সাবস্ট্রেট দ্রবণ HRP দ্বারা যোগ করা হয় এবং অনুঘটক করে একটি নীল রঙের পণ্য তৈরি করা হয় যা অ্যাসিডিক স্টপ দ্রবণ যোগ করার পরে হলুদে পরিবর্তিত হয়।হলুদের ঘনত্ব প্লেটে ক্যাপচার করা dsRNA এর লক্ষ্য পরিমাণের সমানুপাতিক।শোষণ 450 এনএম এ পরিমাপ করা হয়।


  • আগে:
  • পরবর্তী:

  • আবেদন

    এই কিটটি অবশিষ্ট dsRNA এর পরিমাণগত পরিমাপের জন্য।

      

    কিট উপাদান

     

    উপাদান

    HCP0033A-1

    HCP0033A-2

    1

    এলিসা মাইক্রোপ্লেট

    8×6

    8×12

    2

    বায়োটিনিলেটেড সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি (100x)

    60μL

    120μL

    3

    এইচআরপি-স্ট্রেপ্টাভিডিন (100x)

    60μL

    120μL

    4

    পাতলা বাফার

    15 মিলি

    30 মিলি

    5

    Tmb সাবস্ট্রেট সমাধান

    6 মিলি

    12 মিলি

    6

    সমাধান বন্ধ করুন

    3 মিলি

    6 মিলি

    7

    ঘনীভূত ধোয়ার বাফার (20x)

    20 মিলি

    40 মিলি

    8

    স্ট্যান্ডার্ড (UTP, 5ng/μL)

    7.5μL

    15μL

    9

    স্ট্যান্ডার্ড (pUTP, 5ng/μL)

    7.5μL

    15μL

    10

    স্ট্যান্ডার্ড (N1-Me-pUTP, 5ng/μL)

    7.5μL

    15μL

    11

    স্ট্যান্ডার্ড (5-OMe-UTP, 5ng/μL)

    7.5μL

    15μL

    12

    STE বাফার

    25 মিলি

    50 মিলি

    13

    প্লেট সিলার

    ২ টুকরা

    4 টুকরা

    14

    নির্দেশ ম্যানুয়াল এবং COA

    1 কপি

    1 কপি

     

    স্টোরেজ এবং স্থিতিশীলতা

    1. অব্যবহৃত কিটের জন্য: পুরো কিটটি 2 ~ 8℃ শেল্ফ লাইফে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।স্টোরেজ স্থিতিশীলতার জন্য শক্তিশালী আলো এড়ানো উচিত।

     

     

    2. ব্যবহৃত কিটের জন্য: একবার মাইক্রোপ্লেট খোলা হলে, অনুগ্রহ করে অব্যবহৃত কূপগুলিকে প্লেট সিলার দিয়ে ঢেকে দিন এবং ডেসিক্যান্ট প্যাক ধারণকারী ফয়েল থলিতে ফিরে যান, ফয়েল পাউচটিকে জিপ-সিল করুন এবং ব্যবহারের পরে যত তাড়াতাড়ি সম্ভব 2~8℃ এ ফিরে যান।অন্যান্য বিকারকগুলি ব্যবহারের পরে যত তাড়াতাড়ি সম্ভব 2~8℃ এ ফেরত দেওয়া উচিত।

     

    উপকরণ প্রয়োজনীয় কিন্তু সরবরাহ করা হয় না

    1. 450±10nm ফিল্টার সহ মাইক্রোপ্লেট রিডার (450 এবং 650 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্য সনাক্ত করতে পারলে ভাল)।

    2. মাইক্রোপ্লেট শেকার।

    3. RNase-মুক্ত টিপস এবং সেন্ট্রিফিউজ টিউব।

     

    অপারেশন ফ্লোচার্ট

     ""

     

     

    তুমি শুরু করার আগে

    1. ব্যবহারের আগে সমস্ত কিটের উপাদান এবং নমুনাগুলিকে ঘরের তাপমাত্রায় (18-25℃) নিয়ে আসুন।কিটটি একবারে ব্যবহার করা না হলে, অনুগ্রহ করে শুধুমাত্র বর্তমান পরীক্ষার জন্য স্ট্রিপ এবং রিএজেন্টগুলি বের করুন এবং অবশিষ্ট স্ট্রিপ এবং বিকারকগুলিকে প্রয়োজনীয় অবস্থায় রেখে দিন।

    2. ওয়াশ বাফার: 20x ঘনীভূত ধোয়ার বাফারের 40mL পাতলা করে 760mL ডিয়োনাইজড বা পাতিত জল দিয়ে 800mL 1× ধোয়ার বাফার প্রস্তুত করুন।

    3. স্ট্যান্ডার্ড: ব্যবহারের আগে স্টক দ্রবণটিকে সংক্ষিপ্তভাবে ঘোরান বা সেন্ট্রিফিউজ করুন।প্রদত্ত চারটি মানের ঘনত্ব হল 5ng/μL।UTP এবং pUTP dsRNA স্ট্যান্ডার্ডের জন্য, স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা আঁকতে দয়া করে স্টক সলিউশনকে 1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312,0.0156,0pg/μL এ STE বাফার দিয়ে পাতলা করুন।N1-Me-pUTP dsRNA স্ট্যান্ডার্ডের জন্য, স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা আঁকতে দয়া করে স্টক সলিউশনকে 2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312, 0pg/μL STE বাফার দিয়ে পাতলা করুন।5-OMe-UTP dsRNA স্ট্যান্ডার্ডের জন্য, স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা আঁকতে দয়া করে স্টক সলিউশনকে 4,2,1,0.5, 0.25,0.125,0.0625, 0pg/μL এ STE বাফার দিয়ে পাতলা করুন।আমরা সুপারিশ করি যে মানগুলি নিম্নোক্ত চার্ট হিসাবে মিশ্রিত করা যেতে পারে:

     

    N1-Me-pUTP dsRNA মান

     

    না.

     

    চূড়ান্ত কন.

    (pg/μL)

    পাতলা করার নির্দেশ

    এসটিই

    বাফার

     

    মান

     

     

    A

     

    B

    C

    D

    E

    F

    G

    H

    100

     

    2

     

    1

    0.5

    0.25

    0. 125

    0.0625

    ০.০৩১২

    0

    49μL

     

    490μL

     

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    1μL 5ng/μL স্ট্যান্ডার্ড

    10μL 100pg/μL

    সমাধান

    250μL দ্রবণ A

    250μL দ্রবণ B

    250μL দ্রবণ C

    250μL সমাধান D

    250μL সমাধান ই

    250μL সমাধান F

    /

    5-OMe-UTP dsRNA স্ট্যান্ডার্ডের জন্য

     

    না.

     

    চূড়ান্ত কন.

    (pg/μL)

    পাতলা করার নির্দেশ

    এসটিই

    বাফার

     

    মান

     

     

     

    A

     

    B

    C

    D

    E

    F

    G

    H

     

    100

     

    4

     

    2

    1

    0.5

    0.25

    0. 125

    0.0625

    0

     

    49μL

     

    480μL

     

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    250μL

    1μL 5ng/μL

    মান

    20μL 100pg/μL

    সমাধান

    250μL দ্রবণ A

    250μL দ্রবণ B

    250μL দ্রবণ C

    250μL সমাধান D

    250μL সমাধান ই

    250μL সমাধান F

    /

    4. বায়োটিনিলেটেড সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি এবং এইচআরপি-স্ট্রেপ্টাভিডিন কার্যকরী সমাধান: ব্যবহারের আগে স্টক দ্রবণটিকে সংক্ষিপ্তভাবে ঘোরান বা সেন্ট্রিফিউজ করুন।পাতলা বাফার দিয়ে কাজের ঘনত্বে তাদের পাতলা করুন।

    5. টিএমবি সাবস্টেট: জীবাণুমুক্ত টিপস দিয়ে দ্রবণের প্রয়োজনীয় ডোজ অ্যাসপিরেট করুন এবং অবশিষ্ট দ্রবণটিকে আবার শিশিতে ফেলবেন না।টিএমবি সাবস্টেট আলোর প্রতি সংবেদনশীল, টিএমবি সাবস্ট্রেটকে দীর্ঘ সময়ের জন্য আলোর সংস্পর্শে রাখবেন না।

     

    প্রোটোকল ব্যবহার করে

    1. পরীক্ষার জন্য প্রয়োজনীয় স্ট্রিপের সংখ্যা নির্ধারণ করুন।ব্যবহারের জন্য ফ্রেমের মধ্যে স্ট্রিপ ঢোকান।এই পরীক্ষায় ব্যবহৃত অবশিষ্ট প্লেট স্ট্রিপগুলি ডেসিক্যান্ট দিয়ে ব্যাগে পুনরায় প্যাক করা উচিত।রেফ্রিজারেটেড স্টোরেজের জন্য ব্যাগটি শক্তভাবে বন্ধ করুন।

    2. উপযুক্ত কূপের মধ্যে 100μL স্ট্যান্ডার্ড, ফাঁকা এবং নমুনাগুলির প্রতিটি পাতলা করুন।প্লেট সিলার দিয়ে ঢেকে দিন।ঘরের তাপমাত্রায় 500rpm-এ ঝাঁকুনি দিয়ে 1ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করুন।সঠিক পরীক্ষার জন্য নমুনাগুলিকে STE বাফার দিয়ে পাতলা করা উচিত যাতে উপযুক্ত ঘনত্ব থাকে।

    3. ধোয়ার ধাপ: দ্রবণটি অ্যাসপিরেট করুন এবং প্রতিটি কূপে 250μL ওয়াশ বাফার দিয়ে ধুয়ে নিন এবং 30 সেকেন্ডের জন্য দাঁড়াতে দিন।শোষক কাগজে প্লেটটি স্ন্যাপ করে সম্পূর্ণরূপে ধোয়ার বাফারটি বাতিল করুন।সম্পূর্ণভাবে 4 বার ধুয়ে ফেলুন।

    4. প্রতিটি কূপে 100μL বায়োটিনিলেটেড সনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি কার্যকরী দ্রবণ যোগ করুন।প্লেট সিলার দিয়ে ঢেকে দিন।ঘরের তাপমাত্রায় 500rpm-এ ঝাঁকুনি দিয়ে 1ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করুন।

    5. ধোয়ার ধাপ পুনরাবৃত্তি করুন।

    6. প্রতিটি কূপে 100μL HRP-স্ট্রেপ্টাভিডিন কার্যকরী দ্রবণ যোগ করুন।প্লেট সিলার দিয়ে ঢেকে দিন।ঘরের তাপমাত্রায় 500rpm-এ ঝাঁকুনি দিয়ে 30মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।

    7. আবার ধোয়ার ধাপ পুনরাবৃত্তি করুন।

    8. প্রতিটি কূপে 100μL টিএমবি সাবস্ট্রেট দ্রবণ যোগ করুন।প্লেট সিলার দিয়ে ঢেকে দিন।আলো থেকে রক্ষা RT এ 30 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।সাবস্ট্রেট দ্রবণ যোগ করার ফলে তরলটি নীল হয়ে যাবে।

    9. প্রতিটি কূপে 50μL স্টপ দ্রবণ যোগ করুন।স্টপ দ্রবণ যোগ করে তরল হলুদ হয়ে যাবে।তারপরে মাইক্রোপ্লেট রিডার চালান এবং অবিলম্বে 450nm এ পরিমাপ পরিচালনা করুন।

     

    ফলাফলের গণনা

    1. প্রতিটি স্ট্যান্ডার্ড, কন্ট্রোল এবং নমুনার জন্য ডুপ্লিকেট রিডিং গড় করুন এবং গড় শূন্য স্ট্যান্ডার্ড অপটিক্যাল ঘনত্ব বিয়োগ করুন।উল্লম্ব (Y) অক্ষে শোষণ এবং অনুভূমিক (X) অক্ষে dsRNA ঘনত্ব সহ একটি আদর্শ বক্ররেখা তৈরি করুন।

    2. একটি 5 বা 4 প্যারামিটার নন-লিনিয়ার ফিট মডেলে বক্ররেখা বিশেষজ্ঞ 1.3 বা ELISA Calc-এর মতো কম্পিউটার-ভিত্তিক কার্ভ-ফিটিং সফ্টওয়্যার দিয়ে গণনা করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

    কর্মক্ষমতা

    1. সংবেদনশীলতা:

    সনাক্তকরণের নিম্ন সীমা: ≤ 0.001pg/μL (UTP-, pUTP-, N1-Me-pUTP-dsRNA-এর জন্য), ≤ 0.01pg/μL (5-OMe-UTP-dsRNA-এর জন্য)।

    পরিমাণের নিম্ন সীমা: 0.0156 pg/μL (UTP-, pUTP-dsRNA-এর জন্য), 0.0312 pg/μL (N1-Me-pUTP-dsRNA-এর জন্য), 0.0625 pg/μL (5-OMe-UTP-dsRNA-এর জন্য)।

    2. যথার্থতা: ইন্ট্রা-অ্যাসের সিভি ≤10%, ইন্টার-অ্যাসের সিভি ≤10%

    3. পুনরুদ্ধার: 80% ~ 120%

    4.লিনিয়ারিটি:0.0156-0.5pg/μL( forUTP-,pUTP-dsRNA)0.0312-1pg/μL(forN1-Me-pUTP dsRNA), 0.0625-1pg/μL(5-OMe-UTP-dsRNA এর জন্য)।

     

    বিবেচনা

    1. TMB প্রতিক্রিয়া তাপমাত্রা এবং সময় গুরুত্বপূর্ণ, কঠোরভাবে নির্দেশ অনুযায়ী তাদের নিয়ন্ত্রণ করুন.

    2. ভাল অ্যাস প্রজননযোগ্যতা এবং সংবেদনশীলতা অর্জনের জন্য, অতিরিক্ত আন-প্রতিক্রিয়াবিহীন বিকারক অপসারণের জন্য প্লেটগুলির সঠিক ধোয়া অপরিহার্য।

    3. সমস্ত রিএজেন্ট ব্যবহার করার আগে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করা উচিত এবং নমুনা বা বিকারক যোগ করার সময় bumbles এড়াতে হবে।

    4. ঘনীভূত ধোয়ার বাফারে (20x) স্ফটিক তৈরি হলে, 37℃ পর্যন্ত উষ্ণ করুন এবং স্ফটিকগুলি সম্পূর্ণ দ্রবীভূত না হওয়া পর্যন্ত আলতোভাবে মেশান।

    5. সোডিয়াম অ্যাজিড (NaN3) ধারণকারী নমুনার পরীক্ষা এড়িয়ে চলুন, কারণ এটি এইচআরপি কার্যকলাপকে ধ্বংস করতে পারে যার ফলে ডিএসআরএনএর পরিমাণ কম অনুমান করা যায়।

    6. পরীক্ষার সময় RNase দূষণ এড়িয়ে চলুন।

    7. স্ট্যান্ডার্ড/নমুনা, শনাক্তকরণ অ্যান্টিবডি এবং SA-HRPও RT এ ঝাঁকুনি ছাড়াই পরিচালিত হতে পারে, তবে এটি সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা একগুণ হ্রাস করতে পারে।এই ক্ষেত্রে, আমরা সুপারিশ করছি UTP এবং pUTP dsRNA মানগুলিকে 2pg/μL থেকে পাতলা করা উচিত, N1-Me-pUTP dsRNA মানগুলিকে 4pg/μL থেকে পাতলা করা উচিত এবং 5-OMe-UTP dsRNA মানগুলিকে 8pg/μL থেকে পাতলা করা উচিত৷এছাড়াও, ঘরের তাপমাত্রায় 60 মিনিটের জন্য HRP-স্ট্রেপ্টাভিডিন কার্যকরী দ্রবণটি ইনকিউবেট করুন।ফ্লাস্ক শেকার ব্যবহার করবেন না, কারণ ফ্লাস্ক শেকার ভুল ফলাফল হতে পারে।

     

    সাধারণ ফলাফল

    1. স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ডেটা

    একাগ্রতা

    (pg/μl)

    N1-Me-pUTP পরিবর্তিত dsRNA মান

    OD450-OD650(1)

    OD450-OD650(2)

    গড়

    2

    2.8412

    2.7362

    2.7887

    1

    1.8725

    1.9135

    1.8930

    0.5

    1.0863

    1.1207

    1.1035

     

     ""

    0.25

    0.623

    0.6055

    0.6143

    0.125

    0.3388

    0.3292

    0.3340

    0.0625

    0.1947

    0.1885

    0.1916

    ০.০৩১২

    0. 1192

    0.1247

    0.1220

    0

    ০.০৫৬৭

    0.0518

    0.0543

    2. স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা গণনা

    3. লাইনার সনাক্তকরণ পরিসীমা: 0.0312- 1pg/μL

    ঘনত্ব (pg/μl)

    OD450-OD650

    1

    1.8930

    0.5

    1.1035

    ""

    0.25

    0.6143

    0.125

    0.3340

    0.0625

    0.1916

    ০.০৩১২

    0.1220

    এখানে আপনার বার্তা লিখুন এবং আমাদের পাঠান