DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) হল একটি endodeoxyribonuclease যা একক- বা ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড DNA হজম করতে পারে।এটি 5′-টার্মিনালে ফসফেট গ্রুপ এবং 3′-টার্মিনালে হাইড্রোক্সিল সহ মনোডিঅক্সিনিউক্লিওটাইড বা একক- বা ডবল-স্ট্র্যান্ডেড অলিগোডিঅক্সিনিউক্লিওটাইড তৈরি করতে ফসফোডিস্টার বন্ডগুলিকে স্বীকৃতি দেয় এবং ক্লিভ করে।DNase I-এর ক্রিয়াকলাপ Ca2+ এর উপর নির্ভর করে এবং Mn2+ এবং Zn2+ এর মতো দ্বিমুখী ধাতব আয়ন দ্বারা সক্রিয় করা যেতে পারে।5mM Ca2+ এনজাইমকে হাইড্রোলাইসিস থেকে রক্ষা করে।Mg2+ এর উপস্থিতিতে, এনজাইমটি এলোমেলোভাবে ডিএনএর যেকোন স্ট্র্যান্ডের যেকোন সাইটকে চিনতে এবং ক্লিভ করতে পারে।Mn2+ এর উপস্থিতিতে, DNA-এর ডাবল স্ট্র্যান্ডগুলিকে একইসাথে চিনতে পারে এবং প্রায় একই জায়গায় ক্লিভ করে ফ্ল্যাট প্রান্তের DNA টুকরা বা 1-2 টি নিউক্লিওটাইড ছড়িয়ে থাকা আঠালো শেষ DNA টুকরা তৈরি করে।
পণ্য সম্পত্তি
বোভাইন প্যানক্রিয়াস DNase I ইস্ট এক্সপ্রেশন সিস্টেমে প্রকাশ করা হয়েছিল এবং শুদ্ধ করা হয়েছিল।
Cউপাদান
উপাদান | আয়তন | |||
0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
DNase I, RNase-মুক্ত | 20μL | 200μL | 1 মিলি | 10 মিলি |
10×DNase I বাফার | 1 মিলি | 1 মিলি | 5×1mL | 5×10mL |
পরিবহন এবং সঞ্চয়স্থান
1. স্টোরেজ স্থায়িত্ব: - স্টোরেজের জন্য 15℃~-25℃;
2. পরিবহন স্থিতিশীলতা: বরফ প্যাক অধীনে পরিবহন;
3. সরবরাহ করা হয়েছে: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% গ্লিসারল, pH 7.6 এ 25℃।
ইউনিট সংজ্ঞা
এক ইউনিটকে এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয় যা 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 10 মিনিটের মধ্যে 1 µg pBR322 DNA সম্পূর্ণরূপে হ্রাস করবে।
মান নিয়ন্ত্রণ
RNase:37 ℃ তাপমাত্রায় 1.6 μg MS2 RNA সহ DNase I এর 5U 4 ঘন্টার জন্য অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরসিস দ্বারা নির্ধারিত কোন অবনতি দেয় না।
ব্যাকটেরিয়াল এন্ডোটক্সিন:LAL-পরীক্ষা, চাইনিজ ফার্মাকোপিয়া IV 2020 সংস্করণ অনুযায়ী, জেল সীমা পরীক্ষার পদ্ধতি, সাধারণ নিয়ম (1143)।ব্যাকটেরিয়াল এন্ডোটক্সিন কন্টেন্ট ≤10 EU/mg হওয়া উচিত।
ব্যবহারবিধি
1. নীচে তালিকাভুক্ত অনুপাত অনুযায়ী RNase-মুক্ত টিউবে প্রতিক্রিয়া সমাধান প্রস্তুত করুন:
উপাদান | আয়তন |
আরএনএ | X μg |
10 × DNase I বাফার | 1 μL |
DNase I, RNase-মুক্ত (5U/μL) | 1 U প্রতি μg RNA |
ডিডিএইচ2O | 10 μL পর্যন্ত |
15 মিনিটের জন্য 2.37 ℃;
3. প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে সমাপ্তি বাফার যোগ করুন, এবং DNase I নিষ্ক্রিয় করতে 10 মিনিটের জন্য 65℃ তাপমাত্রায় তাপ করুন। নমুনাটি পরবর্তী প্রতিলিপি পরীক্ষার জন্য সরাসরি ব্যবহার করা যেতে পারে।
মন্তব্য
1. প্রতি μg RNA-এর জন্য 1U DNase I ব্যবহার করুন, অথবা 1μg RNA-এর কম জন্য 1U DNase I ব্যবহার করুন।
2. এনজাইম নিষ্ক্রিয়করণের সময় RNA ক্ষয় হওয়া থেকে রক্ষা করার জন্য 5 মিমি এর চূড়ান্ত ঘনত্বে EDTA যোগ করা উচিত।