সিএইচও এইচসিপি এলিসা কিট
এই পরীক্ষায় একটি এক-পদক্ষেপ ইমিউনোসর্বেন্ট ELISA পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়।CHOK1 HCP সমন্বিত নমুনাগুলি একই সাথে HRP-লেবেলযুক্ত ছাগলের অ্যান্টি-CHOK1 অ্যান্টিবডি এবং ELISA প্লেটে প্রলিপ্ত অ্যান্টি-CHOK1 অ্যান্টিবডির সাথে প্রতিক্রিয়া দেখায়, অবশেষে সলিড-ফেজ অ্যান্টিবডি-HCP-লেবেলযুক্ত অ্যান্টিবডির একটি স্যান্ডউইচ কমপ্লেক্স তৈরি করে।ELISA প্লেট ধুয়ে আনবাউন্ড অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি অপসারণ করা যেতে পারে।টিএমবি সাবস্ট্রেটটি পর্যাপ্ত প্রতিক্রিয়ার জন্য কূপে যোগ করা হয়।স্টপ দ্রবণ যোগ করার পরে রঙের বিকাশ বন্ধ হয়ে যায় এবং 450/650nm এ প্রতিক্রিয়া সমাধানের OD বা শোষণের মান একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার দিয়ে পড়া হয়।OD মান বা শোষণ মান সমাধানের HCP বিষয়বস্তুর সমানুপাতিক।এটি থেকে, দ্রবণে HCP ঘনত্ব আদর্শ বক্ররেখা অনুযায়ী গণনা করা যেতে পারে।
আবেদন
এই কিটটি নমুনায় CHOK1 হোস্ট সেল প্রোটিনের অবশিষ্টাংশের পরিমাণগতভাবে সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়।
Cউপাদান
| S/N | উপাদান | একাগ্রতা | জমা শর্ত |
| 1 | CHOK1 HCP স্ট্যান্ডার্ড | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | অ্যান্টি-চো এইচসিপি-এইচআরপি | 0.5mg/mL | ≤–20℃, আলো থেকে রক্ষা করুন |
| 3 | টিএমবি | NA | 2-8℃, আলো থেকে রক্ষা করুন |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | সমাধান বন্ধ করুন | NA | RT |
| 6 | মাইক্রোপ্লেট সিলার | NA | RT |
| 7 | বিএসএ | NA | 2-8℃ |
| 8 | উচ্চ শোষণ প্রাক আবরণ প্লেট | NA | 2-8℃ |
সরঞ্জাম প্রয়োজন
| ভোগ্য দ্রব্য / সরঞ্জাম | উত্পাদন | ক্যাটালগ |
| মাইক্রোপ্লেট রিডার | আণবিক ডিভাইস | Spectra Max M5, M5e, বা সমতুল্য |
| থার্মোমিক্সার | এপেনডর্ফ | Eppendorf/5355, বা সমতুল্য |
| ঘূর্ণি মিশুক | আইকেএ | MS3 ডিজিটাল, বা সমতুল্য |
সঞ্চয়স্থান এবং স্থিতিশীলতা
1.-25~-15°C তাপমাত্রায় পরিবহন।
2.সারণী 1 এ দেখানো হয়েছে স্টোরেজ শর্ত;উপাদান 1-2 সংরক্ষণ করা হয় ≤–20°C,5-6 সংরক্ষণ করা হয় RT,3、4、7、8 2-8℃ এ সংরক্ষণ করা হয়;বৈধতা সময়কাল 12 মাস।
পণ্যের পরামিতি
1.সংবেদনশীলতা: 1ng/mL
2.সনাক্তকরণ পরিসীমা: 3- 100ng/mL
3.যথার্থতা: ইন্ট্রা-অ্যাস CV≤ 10%, ইন্টার-অ্যাস CV≤ 15%
4.HCP কভারেজ: >80%
5.সুনির্দিষ্টতা: এই কিটটি সর্বজনীন কারণ এটি বিশেষভাবে CHOK1 HCP-এর সাথে পরিশোধন প্রক্রিয়ার স্বাধীন প্রতিক্রিয়া দেখায়।
বিকারক প্রস্তুতি
1.PBST 0.05%
20×PBST 0.05% এর 15 মিলি নিন, ডিডিএইচে মিশ্রিত2O, এবং 300 মিলি পর্যন্ত তৈরি।
2.1.0% BSA
বোতল থেকে 1 গ্রাম BSA নিন এবং 100 মিলি পিবিএসটি 0.05% পাতলা করুন, সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত না হওয়া পর্যন্ত ভালভাবে মেশান এবং 2-8 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করুন।প্রস্তুত পাতলা বাফার 7 দিনের জন্য বৈধ।এটি প্রয়োজন হিসাবে প্রস্তুত করার সুপারিশ করা হয়।
3.সনাক্তকরণ সমাধান 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP এর 48μL নিন এবং 2μg/mL সনাক্তকরণ সমাধানের চূড়ান্ত ঘনত্ব পেতে 1% BSA এর 11,952μL পাতলা করুন।
4.QC এবং CHOK1 HCP স্ট্যান্ডার্ডের প্রস্তুতি
| নল না. | আসল | একাগ্রতা | আয়তন | 1% BSA | মোট আয়তন | ফাইনাল |
| A | স্ট্যান্ডার্ড | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
সারণি: QC এবং মান প্রস্তুতকরণ
পরীক্ষা পদ্ধতি
1.উপরে "রিএজেন্ট প্রস্তুতি" এ নির্দেশিত হিসাবে বিকারক প্রস্তুত করুন।
2.প্রতিটি কূপে 50μL মান, নমুনা এবং QC (সারণী 3 পড়ুন) নিন, তারপর 100μL ডিটেকশন সলিউশন যোগ করুন (2μg/mL);সিলার দিয়ে প্লেটটি ঢেকে দিন এবং ELISA প্লেটটি থার্মোমিক্সারের উপর রাখুন।2 ঘন্টার জন্য 500rpm, 25±3℃ এ ইনকিউবেট করুন।
3.সিঙ্কে মাইক্রোপ্লেটটি উল্টে দিন এবং আবরণ সমাধানটি ফেলে দিন।ELISA প্লেট ধোয়ার জন্য PBST 0.05% এর 300μL পিপেট প্রতিটি কূপে ঢেলে দিন এবং দ্রবণটি ফেলে দিন এবং 3 বার ধোয়ার পুনরাবৃত্তি করুন।একটি পরিষ্কার কাগজের তোয়ালে প্লেটটি উল্টে দিন এবং শুকিয়ে নিন।
4.প্রতিটি কূপে TMB সাবস্ট্রেটের 100μL (টেবিল 1 দেখুন) যোগ করুন, ELISA প্লেটটি সিল করুন এবং 15 মিনিটের জন্য 25±3℃ এ অন্ধকারে সেঁকুন।
5.প্রতিটি কূপের মধ্যে স্টপ দ্রবণের 100μL পিপেট।
6.মাইক্রোপ্লেট রিডার দিয়ে 450/650nm তরঙ্গদৈর্ঘ্যে শোষণ পরিমাপ করুন।
7.SoftMax বা সমতুল্য সফ্টওয়্যার দ্বারা ডেটা বিশ্লেষণ করুন।একটি চার-প্যারামিটার লজিস্টিক রিগ্রেশন মডেল ব্যবহার করে আদর্শ বক্ররেখা প্লট করুন।
স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ উদাহরণ
দ্রষ্টব্য: যদি নমুনায় এইচসিপির ঘনত্ব স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখার উপরের সীমা ছাড়িয়ে যায়, তবে পরীক্ষার আগে এটিকে ডিলিউশন বাফার দিয়ে সঠিকভাবে পাতলা করতে হবে।
মন্তব্য
স্টপ সলিউশন হল 2M সালফিউরিক অ্যাসিড, দয়া করে স্প্ল্যাশিং এড়াতে যত্ন সহকারে পরিচালনা করুন!
