BspQI
BspQI কে E. coli তে পুনরায় সংযোজন করা যেতে পারে যা নির্দিষ্ট সাইট চিনতে পারে এবং এর অধীনে উত্পাদিত হয়
BspQI, একটি IIs সীমাবদ্ধতা endonuclease সীমাবদ্ধতা endonuclease, একটি রিকম্বিন্যান্ট ই. কোলাই স্ট্রেন থেকে উদ্ভূত যা ব্যাসিলাস স্ফেরিকাস থেকে ক্লোন করা এবং পরিবর্তিত BspQI জেন বহন করে।এটি নির্দিষ্ট সাইটগুলিকে চিনতে পারে এবং স্বীকৃতির ক্রম এবং ক্লিভেজ সাইটগুলি নিম্নরূপ:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
পণ্যের বৈশিষ্ট্য
1. উচ্চ কার্যকলাপ, দ্রুত হজম;
2. কম তারকা কার্যকলাপ, "স্ক্যাল্পেল" এর মত সঠিক কাটা নিশ্চিত করা;
3. বিএসএ ছাড়া এবং পশু-উৎপত্তি মুক্ত;
মিথিলেশন সংবেদনশীলতা
Dআমি মিথাইলেশন:সংবেদনশীল নয়;
Dসেমি মিথাইলেশন:সংবেদনশীল নয়;
সিপিজি মিথিলেশন:সংবেদনশীল নয়;
জমা শর্ত
পণ্য পাঠানো উচিত ≤ 0℃;-25~- 15℃ অবস্থায় স্টোর করুন।
স্টোরেজ বাফার
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml রিকম্বিন্যান্ট অ্যালবামিন, 0. 1% Trition X- 100 এবং 50% গ্লিসারল (pH 7.0 @ 25°C)।
ইউনিট সংজ্ঞা
50 μL এর মোট বিক্রিয়া আয়তনে 50°C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার মধ্যে 1µg অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ ডিএনএ হজম করতে প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে এক ইউনিটকে সংজ্ঞায়িত করা হয়।
মান নিয়ন্ত্রণ
প্রোটিন বিশুদ্ধতা পরীক্ষা (SDS-PAGE):BspQI এর বিশুদ্ধতা ≥95% SDS-PAGE বিশ্লেষণ দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল।
RNase:1.6μg MS2 RNA সহ BspQI এর 10U 50℃ এ 4 ঘন্টার জন্য অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত কোন অবনতি দেয় না।
অ-নির্দিষ্ট DNase কার্যকলাপ:BspQI এর 10U 1μg λ ডিএনএ সহ 50℃ তে 16 ঘন্টার জন্য, 1ঘন্টার জন্য 50℃ এর তুলনায়, অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা নির্ধারিত কোনও অতিরিক্ত ডিএনএ পাওয়া যায় না।
লিগেশন এবং রিকাটিং:10U BspQI সহ 1 μg λDNA হজম করার পরে, DNA খণ্ডগুলি 16ºC তাপমাত্রায় T4 DNA ligase দিয়ে বন্ধ করা যেতে পারে।এবং এই বন্ধনযুক্ত টুকরোগুলি BspQI দিয়ে পুনরায় কাটা যেতে পারে।
ই কোলাই ডিএনএ: E. coli 16s rDNA-নির্দিষ্ট TaqMan qPCR সনাক্তকরণ দেখিয়েছে যে E.coli জিনোমের অবশিষ্টাংশ ≤ 0.1pg/ul.
হোস্ট প্রোটিন অবশিষ্টাংশ:≤ 50 পিপিএম
ব্যাকটেরিয়াল এন্ডোটক্সিন: LAL-পরীক্ষা, চাইনিজ ফার্মাকোপিয়া IV 2020 সংস্করণ অনুযায়ী, জেল সীমা পরীক্ষার পদ্ধতি, সাধারণ নিয়ম (1143)।ব্যাকটেরিয়াল এন্ডোটক্সিন কন্টেন্ট ≤10 EU/mg হওয়া উচিত।
প্রতিক্রিয়া সিস্টেম এবং শর্তাবলী
| উপাদান | আয়তন |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| ডিএনএ | 1 μg |
| 10 x BspQ I বাফার | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL পর্যন্ত |
প্রতিক্রিয়া শর্ত: 50℃, 1~ 16 ঘন্টা।
তাপ নিষ্ক্রিয়করণ: 20 মিনিটের জন্য 80 ডিগ্রি সেলসিয়াস।
প্রস্তাবিত প্রতিক্রিয়া সিস্টেম এবং শর্ত তুলনামূলকভাবে ভাল এনজাইম হজম প্রভাব প্রদান করতে পারে, যা শুধুমাত্র রেফারেন্সের জন্য, বিস্তারিত জানার জন্য পরীক্ষামূলক ফলাফল দেখুন।
পণ্য আবেদন
সীমাবদ্ধতা এন্ডোনিউক্লিজ হজম, দ্রুত ক্লোনিং।
মন্তব্য
1. এনজাইমের আয়তন ≤ বিক্রিয়ার আয়তনের 1/10।
2. গ্লিসারলের ঘনত্ব 5% এর বেশি হলে তারকা কার্যকলাপ ঘটতে পারে।
3. প্রস্তাবিত অনুপাতের নিচে সাবস্ট্রেট হলে ক্লিভেজ কার্যকলাপ ঘটতে পারে।
